一氧化氮对小鼠胚胎体外发育的影响

论文摘要

胚胎培养技术是动物体外胚胎生产的关键环节之一,是生物技术的一个核心部分。近年来,胚胎培养技术虽然已得到很大程度的提高,但是还存在在生产效率低下、培养体系不稳定、胚胎质量不高等问题。NO作为一种自由基性质的生物信使,在动物体内发挥多种效应,在早期胚胎发育过程中具有调节作用,但目前关于NO影响早期胚胎发育的研究报道较少。本试验利用昆明小鼠作为试验材料,在小鼠体外受精液和胚胎培养液分别添加不同浓度的SNP,添加SNP的浓度分别为0mmol/L、1mmol/L、0.1mmol/L、0.01mmol/L和0.001mmol/L。探讨不同浓度SNP对小鼠体外受精、受精后胚胎及体内胚体外发育卵裂率、囊胚率、4-细胞率、囊胚总细胞数等指标的影响。结果表明:①体内胚体外培养时,0.01mmol/L SNP组、0.001mmol/L SNP组和0mmol/L SNP组对小鼠胚胎卵裂率没有差异（P＞0.05）;但是4-细胞率0.01mmol/L SNP组显著高于0.001mmol/L SNP组和0mmol/L SNP组（P＜0.05）,0.001mmol/L SNP组与0mmol/L SNP组之间没有差异（P＞0.05）;囊胚率0.01mmol/LSNP组、0.001mmol/L SNP组和0mmol/L SNP组之间没有差异（P＞0.05）:就囊胚总细胞数而言,0.001mmol/L SNP组显著高于0.01mmol/L SNP组和0 mmol/LSNP组（P＜0.05）;就是在卵裂率、4-细胞率、囊胚率和囊胚总细胞数等方面,0.01mmol/L SNP组、0.001mmol/L SNP组和0mmol/L SNP组均极显著高于0.1mmol/L SNP组和1.0mmol/L SNP组（P＜0.01）,0.1mmol/L SNP组与1.0mmol/LSNP组之间也存在显著差异（P＜0.05）。②小鼠体内胚体外培养4-细胞前添加SNP时,0.001mmol/L SNP组与0mmol/L SNP组和0.01mmol/L SNP组之间囊胚率没有显著差异（P＞0.05）,但0.01mmol/L SNP组囊胚率显著高于0mmol/L SNP组（P＜0.05）,0.01mmol/L SNP组、0.001mmol/L SNP组和0mmol/L SNP组囊胚率均极显著高于0.1mmol/L SNP组和1.0mmol/L SNP组（P＜0.01）。③体外受精时,0.001mmol/L SNP组卵裂率显著高于0mmol/L SNP组和0.01mmol/L SNP组（P＜0.05）,0.01mmol/L SNP组与0mmol/L SNP组之间卵裂率没有显著差异（P＞0.05）:0mmol/L SNP组、0.01mmol/L SNP组、0.001mmol/L SNP组之间囊胚率没有显著差异（P＞0.05）;对胚胎进行囊胚总细胞计数时发现,在小鼠受精液中添加0.001mmol/L SNP的胚胎总细胞数显著高于0mmol/L SNP组和0.01mmol/L SNP组（P＜0.05）,但0.01mmol/L SNP组与0mmol/L SNP组之间没有显著差异（P＞0.05）;0.01mmol/L SNP组、0.001mmol/L SNP组和0mmol/L SNP组卵裂率和囊胚率均极显著高于0mmol/L SNP组和1.0mmol/L SNP组（P＜0.01）,0.1mmol/L SNP组极显著高于1.0mmol/L SNP组（P＜0.01）。④体外受精胚培养时,0.01mmol/L SNP组的4-细胞率显著高于0mmol/L SNP组和0.001mmol/L SNP组（P＜0.05）,0mmol/L SNP组与0.001mmol/L SNP组之间没有差异（P＞0.05）。三组均极显著高于0.1mmol/L SNP组和1.0mmol/L SNP组（P＜0.01）。0.1mmol/L SNT组极显著高于1.0mmol/L SNP组（P＜0.01）;囊胚率0mmol/L SNP组、0.01mmol/L SNP组和0.001mmol/L SNP组之间没有差异（P＞0.05）,三组均极显著高于0.1 mmol/L SNP组和1.0 mmol/L SNP组（P＜0.01）,0.1mmol/L SNP组与1.0mmol/L SNP组相比,囊胚率极显著高于1.0mmol/L SNP组（P<0.01）。⑤不同浓度SNP影响小鼠胚胎发育质量,0.1mmol/L SNP组和1.0mmol/L SNP组胚胎碎裂及发育阻滞现象均高于其他三组。以上结果表明,在小鼠体外受精液和胚胎培养液中添加0.001mmol/LSNP～0.01mmol/L SNP能够促进小鼠早期胚胎发育,但是添加过高浓度的SNP能对小鼠早期胚胎发育起到明显的抑制作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 文献综述
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 试剂配制方法
• 1.5 小鼠体内胚的获得和培养
• 1.6 小鼠体外受精和受精胚的培养
• 1.6.1 卵母细胞准备
• 1.6.2 精子准备
• 1.6.3 体外受精及胚胎收集
• 1.6.4 胚胎培养
• 1.7 各项指标判断标准
• 1.7.1 卵裂率
• 1.7.2 4-细胞率
• 1.7.3 囊胚率
• 1.7.4 囊胚细胞计数
• 1.8 试验设计
• 1.9 数据统计
• 2 结果与分析
• 2.1 SNP对小鼠体内胚发育的影响
• 2.2 4-细胞前添加SNP对小鼠胚胎发育的影响
• 2.3 受精液中添加不同浓度SNP对小鼠体外受精效果的影响
• 2.4 培养液中添加不同浓度SNP对小鼠体外受精胚发育的影响
• 2.5 SNP对小鼠胚胎质量的影响
• 3 讨论
• 3.1 不同浓度SNP对小鼠体内胚体外培养效果的影响
• 3.1.1 SNT对小鼠胚胎卵裂率的影响
• 3.1.2 SNP对小鼠胚胎4-细胞率的影响
• 3.1.3 SNP对小鼠胚胎囊胚率的影响
• 3.1.4 SNP对小鼠胚胎囊胚细胞总数的影响
• 3.2 4-细胞前添加不同浓度SNP对小鼠胚胎发育的影响
• 3.3 不同浓度SNP对小鼠体外受精效果的影响
• 3.3.1 SNP对小鼠体外受精卵裂率的影响
• 3.3.2 SNP对小鼠体外受精囊胚率的影响
• 3.3.3 SNP对小鼠体外受精胚囊胚细胞总数的影响
• 3.4 不同浓度SNP对小鼠受精胚发育的影响
• 3.5 高浓度SNP对小鼠胚胎发育的影响
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介