雷公藤内酯醇对慢性脑缺血模型大鼠海马突触素和突触后致密物95的影响

论文摘要

目的：慢性脑缺血（chronic cerebral ischemia, CCI）常伴发于血管性痴呆、Alzheimer病、Binswanger病等多种脑血管疾病的病理过程,在临床上以认知功能障碍和神经功能障碍为主要表现,其发病机制非常复杂,近年来的研究表明,免疫炎症反应在CCI所致的认知功能障碍中发挥重要作用。雷公藤内酯醇（triptolide,TP）是我国传统的抗炎中药,具有抗炎、免疫抑制作用,在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等免疫性疾病的治疗方面已取得了较好的疗效。本实验拟观察TP对CCI模型大鼠海马神经元突触素（synaptophysin,SYN）和突触后致密物95（postsynaptic density 95, PSD-95）表达的影响,从抗炎、免疫调节的角度来探讨TP对CCI模型大鼠海马突触结构的保护作用,为临床上防治CCI提供试验依据。方法：取30只健康成年雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、治疗组,每组10只。模型组和治疗组采用双侧颈总动脉永久性结扎法（2-VO）建立CCI模型。对照组大鼠只暴露双侧颈总动脉。治疗组大鼠每日腹腔注射TP溶液0.4mg/kg,模型组和对照组大鼠每日腹腔注射等容积4%丙二醇溶液,连续注射28d。采用甲苯胺蓝尼氏染色检测各组大鼠海马神经元的形态和数目,采用免疫组织化学法和]RT-PCR法检测各组大鼠海马SYN和PSD-95蛋白及mRNA的表达。结果：1.甲苯胺蓝尼氏染色结果显示,对照组大鼠海马CA1区锥体层神经元数目和形态未见明显改变,细胞呈锥形,排列规则,界限清晰；模型组大鼠海马CA1区锥体层神经元数目较对照组明显减少,细胞呈不规则形,细胞界限不清,间隙增大；治疗组大鼠海马CA1区锥体层神经元损伤程度较模型组轻。2.SYN免疫组织化学染色结果显示,对照组大鼠海马CA1区分子层SYN阳性产物染色深且分布均匀；模型组大鼠海马CA1区分子层SYN阳性产物数量和平均光密度明显低于对照组；治疗组大鼠海马CA1区分子层SYN阳性产物数量和平均光密度明显高于模型组。3.PSD-95免疫组织化学染色结果显示,对照组大鼠海马CA1区锥体层PSD-95阳性细胞分布较密集,呈锥形,可见轴突和树突样突起；模型组大鼠海马CA1区锥体层PSD-95阳性细胞数和平均光密度明显低于对照组；治疗组大鼠海马CA1区锥体层PSD-95阳性细胞数和平均光密度值明显高于模型组。4.RT-PCR检测显示,模型组大鼠海马SYN和PSD-95 mRNA含量较对照组降低；治疗组大鼠海马SYN（?）（?）PSD-95 mRNA含量较模型组增加。结论：TP能促进大鼠海马CA1区SYN和PSD-95蛋白及mRNA的表达,对CCI模型大鼠海马神经元具有保护作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要试剂和药品
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.1.4 主要试剂和溶液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 动物分组和模型建立
• 2.2.2 实验动物用药
• 2.2.3 取材、固定和切片
• 2.2.4 甲苯胺蓝尼氏染色
• 2.2.5 免疫组织化学染色（SP法）
• 2.2.6 RNA的提取与鉴定
• 2.2.7 RT-PCR测定SYN和PSD-95
• 2.2.8 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 甲苯胺蓝尼氏染色
• 3.2 免疫组织化学染色
• 3.2.1 SYN免疫组织化学染色
• 3.2.2 PSD-95免疫组织化学染色
• 3.3 RT-PCR
• 3.3.1 RNA质量鉴定结果
• 3.3.2 SYNmRNA的检测
• 3.3.3 PSD-95mRNA的检测
• 第4章 讨论
• 4.1 SYN和PSD-95的结构与功能
• 4.2 CCI导致的脑损伤
• 4.3 CCI导致SYN和PSD-95的改变
• 4.4 TP对CCI导致SYN和PSD-95损伤的保护作用
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
• 参考文献