白虎汤治疗鸡慢性呼吸道疾病的作用机理研究

论文摘要

鸡慢性呼吸道病（Chronic Respiratory Disease,CRD）是影响家禽养殖业的常见病之一，虽死亡率较低，但可引起许多并发病和继发病，而且传播途径多样化，传播速度非常迅速。目前支原体病的疫苗研制和推广都存在一些问题，因而药物防治仍然是必须的。大量抗生素的应用使得耐药性的出现，使鸡慢性呼吸道病仍然不能得到有效控制。CRD按中兽医辨证当属肺胃热盛，热郁痰阻，宜清肺泄热、养胃益阴。“白虎汤”是清气分热的代表方，本实验开展了“白虎汤”对鸡慢性呼吸道病的药效机理研究。研究目的：1．研究“白虎汤”治疗鸡慢性呼吸道病的药效学。2．通过药效学指标探讨“白虎汤”治疗CRD的药效机理。研究方法：1．二倍稀释法测定“白虎汤”对鸡毒支原体（Mycoplasm gallisepticum，MG）的MIC1、MIC2和亚MIC，并电镜观察MG在MIC和亚MIC条件下作用48h后的形态与超微结构变化。2．“白虎汤”对CRD血浆中自由基的影响：将180只两周龄艾维茵鸡随机分成6组，其中5组在两周龄时气管接种MGPG31，与健康对照组分开饲养。造模一周后，出现呼吸道症状，MG抗体阳性。A组为健康对照组，B组为病理对照组，只造模不治疗；C组为白虎汤高剂量治疗组（4g／kg）；D组为白虎汤中剂量治疗组（2g／kg）；E组为白虎汤低剂量治疗组（1g／kg）；F组为恩若沙星对照组（0.5mg／kg），每天给药一次，连续五天，并于每日给药后0h、2h、4h、8h、12h采血，A、B两组同步进行，测血浆中SOD和MDA值的动态变化。3．“白虎汤”治疗CRD对SP-A（肺表面活性物质相关蛋白-A，Surfactantassociated Protein A）表达的影响，每天用药12h后取左下肺进行免疫组化染色，观察SP-A的表达量的变化。研究结果：1．体外抑菌实验测得：“白虎汤”对MGPG31的MIC1，MIC2和亚MIC分别为0.047g／mL，0.094g／mL，0.0235g／mL。电镜观察结果为：“白虎汤”主要作用于繁殖期支原体，影响细胞膜通透性和形态而起到抑菌作用。2．“白虎汤”对自由基的影响实验结果，MGPG31造模后SOD值持续下降，MDA值持续上升，与健康对照组差异极显著。白虎汤治疗组SOD值上升，MDA值下降，治疗五天后与A组无显著差异，与B组差异显著。表明“白虎汤”可以抵抗自由基对细胞膜的打击并提高机体清除自由基能力，降低脂质过氧化程度。3．“白虎汤”对SP-A表达的影响：A组呈强阳性反应，SP-A主要为肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌，胞浆着色。造模第8天时，上皮细胞脱落，组织纤维化，出现团块状的阳性物质，SP-A阳性细胞减少，形态模糊，SP-A阳性细胞数较低；第12天时几乎未见阳性反应，染色程度降低。治疗三天后，C组SP-A阳性细胞增多，表达呈强阳性，可见较清晰的阳性细胞。，D组SP-A阳性细胞增多，表达呈弱阳性，阳性细胞形态较模糊。治疗四天后，E组SP-A阳性细胞有所增加，染色强度明显减弱，较C、D两组增加缓慢。F组可见少量的SP-A阳性细胞，呈弱阳性反应。结果表明，“白虎汤”有降低MG的损伤作用，保护肺Ⅱ型上皮细胞和支气管Clara细胞。结论：1．“白虎汤”主要作用于繁殖期支原体，影响细胞膜通透性和形态而起到抑菌作用。2．体内药效学表明：“白虎汤”可提高机体清除自由基的能力，保护细胞膜，增强SP-A的表达，维持肺组织结构。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 立题背景及文献综述
• 1 立题背景
• 2 文献综述
• 2.1 支原体概述
• 2.2 鸡慢性呼吸道病
• 2.2.1 病原学
• 2.2.2 流行病学
• 2.2.3 临床症状
• 2.2.4 病理变化
• 2.2.5 发病机理
• 2.2.6 治疗现状
• 2.3 白虎汤
• 2.3.1 白虎汤的作用
• 2.4 研究目的及意义
• 第二部分 实验研究部分
• 第一章 白虎汤对鸡毒支原体体外作用机理
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药品
• 1.1.2 中药方
• 1.1.3 试剂
• 1.1.4 仪器
• 1.1.5 菌种
• 1.2 方法
• 1.2.1 白虎汤的制备
• 1.2.2 培养基的制备
• 1.2.3 菌液的制备
• 1.2.4 最小抑菌浓度的测定
• 1.2.5 电镜实验
• 2 结果
• 2.1 中药筛方及MIC结果
• 2.2 透射电镜结果
• 3 分析与讨论
• 3.1 提取方法的筛选
• 3.2 加减方的筛选
• 3.3 MIC实验分析
• 3.4 超微结构变化分析
• 第二章 白虎汤治疗鸡慢性呼吸道病对自由基的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药品
• 1.1.2 中药方
• 1.1.3 试剂
• 1.1.4 仪器
• 1.1.5 菌种
• 1.1.6 实验动物
• 1.2 方法
• 1.2.1 实验分组
• 1.2.2 药品的制备
• 1.2.3 造模
• 1.2.4 治疗与采样
• 1.2.5 SOD和MDA的检测
• 2 结果
• 2.1 SOD结果
• 2.2 MDA值
• 3 分析与讨论
• 第三章 白虎汤治疗对SP-A表达的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药品
• 1.1.2 中药方
• 1.1.3 试剂
• 1.1.4 仪器
• 1.1.5 菌种
• 1.1.6 实验动物
• 1.2 方法
• 1.2.1 实验分组
• 1.2.2 药品的制备
• 1.2.3 造模
• 1.2.4 治疗与采样
• 1.2.5 免疫组化
• 2 结果
• 2.1 结果描述
• 2.2 免疫组化照片
• 3 分析与讨论
• 第三部分 结论与创新
• 1 结论
• 2 创新
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录