靶向瘦素基因的siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

论文摘要

目的通过构建慢病毒介导的靶向瘦素基因的小干扰RNA（siRNA），探讨瘦素对A549细胞体外增殖和凋亡的影响。方法建立siRNA-a组、siRNA-b组及其各自阴性对照组和空白对照组（A549）5组细胞，分别于荧光显微镜下观察细胞5d和11d的生长情况。噻唑蓝（MTT）比色法测定空白对照组、siRNA-a组及其阴性对照组细胞1～6d的生长情况，绘制生长曲线，比较各组细胞增殖差异。流式细胞仪分析各组细胞凋亡率，观察瘦素的siRNA对A549细胞凋亡的影响。RT-PCR和Western bloting方法检测各组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平。结果siRNA-a细胞镜下形态基本正常，5d后荧光效率仍较高，感染稳定，但生长较阴性对照组及空白对照组细胞缓慢。siRNA-b细胞感染48h后，镜下见细胞肿胀，变形，空泡出现，5d后见多量细胞碎片，凋亡小体形成，呈现凋亡状态，11d后可见细胞碎片，已近完全凋亡。MTT实验siRNA-a组细胞从第3天起生长比其他各组均缓慢（P<0.01）。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果：siRNA-a组、siRNA-b组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组。RT-PCR和Western bloting结果显示干扰组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组明显下调。结论慢病毒介导的siRNA能下调肺腺癌A549细胞瘦素基因的表达，从而抑制A549细胞增殖，促进其凋亡。由此可见，瘦素的siRNA有望成为肺腺癌基因治疗的新手段。目的利用RNA干扰（RNA interfenrence，RNAi）技术沉默Leptin基因在人肺腺癌A549细胞株中的表达，探讨Leptin基因表达沉默对A549裸鼠移植瘤生长的影响。方法以慢病毒为载体，将携带针对Leptin基因小干扰RNA序列的A549细胞（干扰组）、质粒空载组细胞（阴性对照组）及普通A549细胞（空白对照组）分别接种于BALB/C裸鼠右侧腋窝皮下，建立A549裸鼠皮下移植瘤模型，观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间、成瘤率、瘤体体积及瘤重，绘制肿瘤生长曲线；免疫组织化学检测Leptin蛋白的表达情况，原位末端转移酶标记法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）检测移植瘤组织凋亡情况。结果与阴性对照组及空白对照组比较，干扰组裸鼠移植瘤成瘤时间晚，瘤体生长缓慢（P<0.05）；瘤体重量明显减轻（P<0.05）。干扰组Leptin蛋白表达水平明显低于阴性对照和空白对照组。干扰组瘤组织细胞凋亡明显增多，凋亡率为（44.1±5.3）%，明显高于阴性对照组的（4.9±1.3）%和空白对照组的（4.6±1.1）%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论沉默Leptin基因表达可有效抑制人肺腺癌移植瘤的生长，Leptin基因有望成为肺癌治疗的靶点之一。

论文目录

• 英文缩略词表
• 第一部分 中文摘要
• 第一部分 英文摘要
• 第二部分 中文摘要
• 第二部分 英文摘要
• 前言
• 第一部分 靶向瘦素基因的 siRNA 对 A549 细胞体外增殖和凋亡的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 RNA 干扰沉默瘦素基因对 A549 细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表文章情况
• 综述
• 参考文献
• 致谢