Wnt通路关键基因在绒山羊绒毛生长一个周期中的表达研究

论文摘要

本研究从内蒙古绒山羊皮肤中提取总RNA,PCR扩增绒山羊的Wnt10b,frizzled,β-catenin基因片段,连接到pGM-T载体、转化,筛选鉴定阳性克隆提取质粒进行测序,用实时荧光定量PCR的方法检测了Wnt10b,frizzled,β-catenin基因在绒山羊绒毛生长一个周期中的表达。结果如下:1)将山羊品种的Wnt10b,frizzled,β-catenin基因的部分序列克隆、测序成功,分别长90bp,235bp,100bp,丰富了山羊Wnt10b,frizzled,β-catenin基因序列。并为克隆羊Wnt10b,frizzled,β-catenin全序列或通过基因转染获得蛋白纯品奠定了基础,对下一步研究该基因在羊被毛生长中的作用有重要意义。2)通过同源性比较可知获得的Wnt10b,frizzled,β-catenin的cDNA序列与小鼠、牛、人的Wnt10b,frizzled,β-catenincDNA序列同源性非常高,同源性分别在90%以上,94%以上,95%以上。说明Wnt10b,frizzled,β-catenin基因保守性很强。3) Wnt10b,frizzled,β-catenin在绒山羊皮肤中均有表达,Wnt10b表达高峰均12月份,frizzled基因的表达量7月份达最高,β-catenin基因的表达量11月份最高。埋植褪黑素后,3月份之后埋植组和对照组表达规律基本相同。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 研究背景
• 1.2 绒山羊概况
• 1.2.1 绒山羊主要品种及特征
• 1.2.2 我国绒山羊概况
• 1.3 绒山羊绒毛生长规律
• 1.3.1 绒山羊毛被特点
• 1.3.2 绒山羊皮肤毛囊的基本结构
• 1.3.3 绒山羊皮肤毛囊周期性生长规律
• 1.4 WNT 传导通路概述
• 1.4.1 WNT 信号转导通路的组成
• 1.4.2 WNT 信号通路介绍
• 1.4.3 WNT 信号的生物效应
• 1.5 WNT 通路关键基因介绍
• 1.5.1 WNT108
• 1.5.2 FRIZZLED
• 1.5.3 Β-CATENIN
• 1.6 本研究的目的和意义
• 2 试验一 WNT108，FRIZZLED，Β-CATENIN 基因片段的克隆及序列分析
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物及组织
• 2.1.2 药品与主要溶液配制
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法与步骤
• 2.2.1 CDNA 的克隆测序实验方法
• 2.2.2 序列测定
• 2.2.3 结果与分析
• 2.3 小结
• 3 试验二 WNT108，FRIZZLED，Β-CATENIN 基因在内蒙古绒山羊皮肤中的表达
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验动物及组织
• 3.1.2 试验分组
• 3.1.3 主要药品和仪器
• 3.1.4 引物设计
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 皮肤组织总 RNA 提取
• 3.2.2 总 RNA 的纯化
• 3.2.3 CDNA 的合成
• 3.2.4 PCR 反应
• 3.2.5 PCR 产物的回收
• 3.2.6 PGM-T 载体的连接反应
• 3.2.7 转化
• 3.2.8 重组质粒的鉴定
• 3.2.9 重组质粒 DNA 提取
• 3.2.10 荧光定量 PCR
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 荧光定量 PCR 检测结果
• 3.3.2 扩增效率及相关系数分析
• 3.3.3 熔解曲线分析
• 3.3.4 GAPDH 和WNT108，FRIZZLED，Β-CATENIN MRNA 表达结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 4 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介