广东“猪高热病”猪群中PRRSV及PRV的流行病学监测

论文摘要

2001年以来,我国大部分养猪密集地区都会出现“猪无名高热症”,该病发病率和死亡率都很高,并且发病迅速,对养猪业造成了极大的危害。2006年6月份以来在我国南方主要养猪省份都爆发了该病。该病的病原复杂,至今尚存在争议。本研究就此开展工作,获得以下结果:1.初步弄清了2004-2006年期间广东省4个地区PRRS和2005-2007年期间广东省4个地区猪伪狂犬病分布以及流行特点。2.分别采用培养的犬肾细胞（MDCK）、猪肾细胞系（PK-15）、仓鼠肾细胞系（BHK-21）、非洲绿猴肾细胞（Marc-145）分离到了1株PRV野毒及4株PRRSV毒株;对4株PRRSV分离株的高变区E片段基因进行的分子克隆证明它们均在基因水平发生了变异;动物试验发现,分离到的PRV野毒株在昆明系小鼠上引起的症状比在猪引起的临床症状更为典型。但该毒株攻击猪后所产生的病理组织变化很典型。这些结果表明,广东省“猪无名高热”不是由单一病毒引起的疾病。3.克隆到了PRV GDSH株gE基因,对其进行了测序。该序列与GeneBank上公布的gE基因序列比对分析表明,PRV GDSH株gE基因序列与Ea株亲缘关系为99.9%。;克隆到了4株PRRSV广东分离株E片段基因,对其进行了测序。该序列与GeneBank上公布的E片段基因序列比对分析表明,4株PRRSV广东分离株均发生了变异,但从遗传进化树看四株PRRSV广东分离株并未发生较大程度的偏离,它们均来自同一分支。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 文献综述
• 第一章 猪高热病的研究进展
• 1.1 猪高热病的临床症状
• 1.2 猪高热病的流行和分布
• 1.3 猪高热病的研究现状
• 1.4 猪群中常见的病毒病
• 1.4.1 猪生殖与呼吸系统综合征
• 1.4.2 猪伪狂犬病
• 1.5 猪群中常见病毒病流行现状
• 1.6 本研究的研究背景、研究目的及意义
• 试验研究
• 第二章 猪高热病猪群中PRRSV 和PRV 的分子生物学调查
• 2.1 材料与试剂
• 2.1.1 血清
• 2.1.2 试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 病料RNA 的提取
• 2.2.2 引物合成
• 2.2.3 PCR 扩增
• 2.2.4 猪伪狂犬病病毒gpI 抗体检测
• 2.3 结果
• 2.3.1 PCR 检测结果
• 2.3.2 样品采集和样品检测结果
• 2.3.3 猪伪狂犬病病毒gpI 抗体检测
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 南方部分省区猪无名高热病病毒的分离鉴定
• 3.1 材料与试剂
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 主要仪器
• 3.1.3 主要试剂
• 3.2 方法
• 3.2.1 病毒的分离
• 3.2.2 病毒的鉴定
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 病毒分离结果
• 50 测定及中和试验结果'>3.3.2 TCID₅₀测定及中和试验结果
• 3.3.3 病毒的泛嗜性结果
• 3.3.4 PRV gD 基因的PCR 扩增
• 3.3.5 动物回归试验
• 3.3.6 病理组织学检测结果
• 3.3.7 PRV gE 基因的PCR 扩增结果
• 3.3.8 重组质粒的酶切结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 广东省猪伪狂犬病毒（PRV） GDSH 株的 GE 基因及 PRRSV E 基因的克隆与序列分析
• 4.1 材料
• 4.1.1 宿主菌、质粒
• 4.1.2 主要仪器
• 4.1.3 主要药品及试剂
• 4.2 方法
• 4.2.1 目的片段的扩增、纯化与回收
• 4.2.2 目的基因的克隆
• 4.2.3 序列分析
• 4.2.4 PCR 产物与pMD18-T 载体的连接
• 4.2.5 感受态细胞的制备
• 4.2.6 连接产物的转化
• 4.2.7 重组质粒的提取与鉴定
• 4.3 结果
• 4.3.1 gE 基因的PCR 扩增
• 4.3.2 重组质粒的筛选结果
• 4.3.3 测序结果及核苷酸序列同源性分析
• 4.4 讨论
• 4.5 小结
• 结论
• 缩略语及中英文对照
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介