论文摘要
[目的] 人脑胶质母细胞瘤是中枢神经系统中恶性程度最高的肿瘤,其侵袭性生长往往是患者肿瘤复发、治疗失败和死亡的重要原因。而且胶质瘤间质血管增生在胶质瘤的侵袭性生长过程中具有重要作用。研究表明细胞外基质的降解在胶质瘤的侵袭过程中起关键作用。一方面,细胞外基质限制肿瘤细胞向周围组织浸润的屏障作用被破坏;另一方面,为血管内皮细胞的芽生、增殖和迁移创造条件,有利于胶质瘤间质新生血管形成。因此,细胞外基质的降解是胶质瘤侵袭性的标志,而基质金属蛋白酶（MMPs）是降解细胞外基质的蛋白酶类中最重要的一类。其中,以降解Ⅳ型胶原为主的MMP-9在胶质瘤的侵袭行为和肿瘤间质血管增生过程中发挥着重要作用。 本课题首先从构建表达MMP-9反义RNA的重组体入手,进行反义封闭YJ905胶质母细胞瘤细胞系的MMP-9基因表达的体外实验;然后利用裸鼠荷瘤模型,进行了反义封闭MMP-9基因表达并联合应用外源性内皮抑素治疗胶质瘤的动物实验研究,以期进一步了解MMP-9在胶质瘤间质血管增生中的作用及反义治疗效果,为选择MMP-9这一基因治疗的靶点治疗胶质母细胞瘤的可行性提供实验依据。 [方法] 本课题的第一部分,我们通过RT-PCR的方法对MMP-9 cDNA 5’端528bp的片段进行了扩增,并将此片段正向和反向插入质粒载体pcDNA3.0的多克隆位点Hind Ⅲ和Xho Ⅰ之间,构建了正义MMP-9重组体和反义MMP-9重组体。经脂质体介导,分别将pcDNA3.0空载质粒、正义重组体、反义重组体转染TJ905细胞,经G418筛选出稳定表达的细胞系;通过RT-PCR和Western Blot对转染细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平进行了检测;利用免疫组化方法分析了转染细胞中MMP-9和Ki-67的表达。
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