PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞NF-κB信号的影响

PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞NF-κB信号的影响

论文摘要

PCV2是断奶猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,在仔猪体内PCV2主要感染单核/巨噬细胞,并导致淋巴细胞的大量缺失,引起多种细胞因子及其相关受体的变化。本试验用PCV2作用于体外培养仔猪脾脏淋巴细胞,探讨核因子KB (NF-κB)信号途径的激活、激活机制及与细胞因子之间的关系,从而为临床上PMWS的炎症反应及其防治提供理论基础。试验一:5头经ELISA检测PCV2抗体阴性的35日龄断奶仔猪,无菌采集脾脏,分离脾脏细胞,分为对照组和攻毒组进行体外培养。攻毒组接种PCV2,并分别于培养后0 h、6 h、12 h、24 h收取淋巴细胞。用激光共聚焦法定性检测NF-KB/P65的核易位,并分别提取细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western-Blot定量检测细胞核中NF-KB/P65和细胞浆中P-IκBα、p-P38的蛋白含量的变化,电泳迁移率(EMSA)法检测细胞核是NF-κB与DNA的结合率。定性结果表明,对照组仔猪淋巴细胞在培养后0h、6h、12h未见NF-κB/P65的核易位,培养24 h的淋巴细胞核内能见到NF-KB/P65;而PCV2接种后6h的淋巴细胞核内就能明显见到NF-KB/P65蛋白,并随着攻毒时间的延长,NF-KB/P65的核易位逐渐增多。定量结果,培养后Oh、6h、12h的对照组淋巴细胞核内,未检测到NF-KB/P65蛋白和NF-κB与DNA的结合,细胞浆内也未能检测到p-IκBa和p-P38蛋白,只有24 h的对照组淋巴细胞中才能检测到各种蛋白。试验组仔猪淋巴细胞,PCV2接种后6h就能明显检测到NF-κB/P65蛋白的核易位,并随着PCV2作用时间延长NF-κB/P65蛋白的核易位逐渐增多,到接种PCV2后24h显著高于其对照组(P<0.05);试验组仔猪淋巴细胞中p-IκBa蛋白含量和NF-κB与DNA的结合率也均随攻毒时间增加而逐渐升高,到攻毒后24h均显著高于对照组(P<0.05);统计学分析显示,淋巴细胞核中NF-κB/P65与细胞浆中p-IκBα含量呈显著正相关,相关系数达0.909(P=0.000);试验组仔猪淋巴细胞中p-P38蛋白含量,在攻毒6 h、12 h和24 h均能检测到,但与对照组相比变化不显著(P>0.05)。用我们实验室曾测定的PCV2对体外培养脾脏细胞分泌细胞因子影响的结果与NF-κB进行相关性分析显示,NF-κB/P65蛋白的核易位与TNF-α、IL-6RmRNA和IL-10RmRNA具有显著的正相关,其相关系数分别达到0.757(P=0.002)、0.783(P=0.000)和0.764(P=0.000);而NF-κB和IL-6、IL-6mRNA、IL-10和IL-10mRNA之间相关性不明显,这可能是非同批次实验造成的,但从一个侧面说明了PCV2可以通过NF-κB信号调节某些细胞因子的转录和表达。以上结果表明,PCV2可通过IκBα的磷酸化途径激活NF-κB,使其发生核易位,并与DNA结合,从而有效调控各种炎性细胞因子的转录和表达。而P38MAPK信号在PCV2调节炎性细胞因子表达过程中的作用不明显。试验二:5头经ELISA检测PCV2抗体阴性的35日龄断奶仔猪,无菌采集脾脏,分离脾脏淋巴细胞进行体外培养,并于培养后0h、12h和18h接种PCV2,24 h后统一收取淋巴细胞。Western-Blot检测NF-κB/P65、p-IκBα、p-P38的蛋白含量的变化,EMSA检测NF-κB与DNA的结合率。结果显示,NF-κB/P65蛋白的表达随PCV2作用时间增加逐渐升高,PCV2作用24 h较Oh和6h极显著升高(P<0.01),较12h显著升高(P<0.05);NF-κB与DNA的结合率也随PCV2作用时间延长逐渐升高,24h时极显著高于0h和6h(P<0.01),较12h显著升高;p-IκBα蛋白的含量,在PCV2作用24h时达到最高,并且极显著高于Oh、6h和12h(P<0.01),除6h组和12h组之间无显著差异(P>0.05)外,其余组之间两两差异均显著;p-P38蛋白含量,在PCV2作用6h时有所下降,12h和24h上升,并在24h显著高于6h(P<0.05),其余组之间变化均不显著(P>0.05)。结果表明,PCV2能通过激活仔猪淋巴细胞中NF-κB信号,从而对相关炎性细胞因子进行调控。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 部分缩写的中英文对照
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 PCV2与P38、NF-κB信号通路
  • 1 猪圆环病毒
  • 1.1 PCV的病原特点
  • 1.2 PCV2的流行病学及其引起的相关疾病
  • 1.3 PMWS的基本情况
  • 1.4 PCV2感染对淋巴细胞的影响
  • 1.5 PCV2对细胞因子的影响
  • 2 全身炎症反应综合征
  • 2.1 全身炎症反应综合征概述
  • 2.2 SIRS与细胞凋亡
  • 3 NF-κB信号转导通路
  • 3.1 NF-κB和IκB的家族成员
  • 3.2 NF-κB的信号转导通路
  • 3.3 NF-κB信号调节途径
  • 3.4 NF-κB对细胞因子的调节
  • 4 P38MAPK信号转导通路
  • 4.1 P38MAPK的结构特征及家族成员
  • 4.2 P38MAPK的信号调节
  • 4.3 P38MAPK对炎性因子的调节
  • 5 P38-NF-κB对于微生物感染的调控
  • 6 实验目的与意义
  • 第二篇 试验研究
  • 第二章 PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞NF-κB信号的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 病毒
  • 1.2 主要试剂和仪器
  • 1.3 实验动物及处理
  • 1.4 激光共聚焦检测NF-κB/P65的核易位
  • 1.5 Western blot法检测NF-κB/P65、p-IκBα的蛋白表达
  • 1.6 EMSA检测NF-κB/P65的迁移率
  • 1.7 数据处理及统计
  • 2 结果
  • 2.1 PCV2对体外培养淋巴细胞NF-κB信号的影响
  • 2.2 PCV2对体外培养仔猪脾脏淋巴细胞p-P38蛋白含量的影响
  • 2.3 NF-κB与p-IκBα、各细胞因子及其受体之间的相关性分析
  • 3 讨论
  • 3.1 PCV2能明显激活NF-κB信号
  • 3.2 PCV2通过IκBα的磷酸化降解而激活NF-κB信号
  • 3.3 PCV2能通过NF-κB途径调控某些细胞因子的表达
  • 3.4 PCV2与P38MAPK途径之间无明显联系
  • 第三章 相同培养时间下PCV2对仔猪淋巴细胞NF-κB信号的动态影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 病毒
  • 1.2 主要试剂和仪器
  • 1.3 实验动物及处理
  • 1.4 Western blot法检测NF-κBP65、p-IκBα和p-P38的蛋白表达
  • 1.5 EMSA检测NF-κB与DNA结合率
  • 1.6 数据处理及统计
  • 2 结果与分析
  • 2.1 PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞核蛋白中NF-κB/P65蛋白含量的影响
  • 2.2 PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞核中NF-κB DNA结合率的影响
  • 2.3 PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞p-IκBα蛋白含量的影响
  • 2.4 PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞p-P38蛋白含量的影响
  • 3 讨论
  • 3.1 PCV2能够显著激活NF-κB的信号
  • 3.2 PCV2对P38MAPK信号的影响
  • 参考文献
  • 全文总结
  • 致谢
  • 相关论文文献

    • [1].约氏疟原虫红内期体外培养的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017(04)
    • [2].蜂胶对体外培养的血管内皮细胞增殖活力的影响[J]. 北京农学院学报 2009(02)
    • [3].促结缔组织增生型成釉细胞瘤细胞的体外培养与鉴定[J]. 中国口腔颌面外科杂志 2008(01)
    • [4].改构型酸性成纤维细胞生长因子对体外培养肝细胞增殖活性的影响[J]. 安徽医科大学学报 2017(11)
    • [5].体外培养过程中许旺细胞S100表达规律研究[J]. 现代生物医学进展 2013(22)
    • [6].积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人胚胎成纤维细胞的影响[J]. 中国医疗前沿 2011(02)
    • [7].影响间日疟原虫红内期短期体外培养的虫源因素研究[J]. 中国血吸虫病防治杂志 2010(01)
    • [8].苦参碱对体外培养的强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞增殖的影响[J]. 北京中医药 2010(05)
    • [9].成人骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的研究进展[J]. 河南科技大学学报(医学版) 2009(02)
    • [10].碱性成纤维细胞生长因子对人体外培养牙髓细胞增殖的影响[J]. 现代口腔医学杂志 2008(02)
    • [11].仿制肉的生产技术及其发展趋势[J]. 食品与发酵工业 2019(22)
    • [12].六味地黄丸水提液对体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖的影响[J]. 生物技术世界 2014(04)
    • [13].造血干细胞体外培养模式的研究进展[J]. 现代生物医学进展 2011(07)
    • [14].氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活[J]. 基础医学与临床 2011(10)
    • [15].温度对体外培养精原细胞增殖和凋亡的影响[J]. 解剖学杂志 2008(06)
    • [16].体外培养小鼠精原干细胞的研究[J]. 畜牧与兽医 2016(07)
    • [17].肌肉来源干细胞表面抗原-1阳性与阴性细胞体外培养成肌特性的比较[J]. 口腔生物医学 2012(03)
    • [18].成骨细胞的体外培养与鉴定[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2011(33)
    • [19].体外培养角膜内皮细胞的鉴定方法[J]. 四川解剖学杂志 2011(04)
    • [20].大黄素对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞的影响[J]. 中国药房 2010(43)
    • [21].人脐静脉内皮细胞的体外培养[J]. 中西医结合心脑血管病杂志 2008(03)
    • [22].体外培养人成纤维细胞模型的建立[J]. 现代医院 2019(12)
    • [23].锌及碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用体外培养骨髓间充质干细胞的生长及增殖[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2010(27)
    • [24].人幼儿心肌细胞体外培养的实验研究[J]. 安徽医学 2009(01)
    • [25].连续应力对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响[J]. 济宁医学院学报 2008(02)
    • [26].高糖抑制体外培养Müller细胞生长[J]. 基础医学与临床 2008(10)
    • [27].人牙周膜成纤维细胞体外培养的研究进展[J]. 国际口腔医学杂志 2012(05)
    • [28].不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响[J]. 中药新药与临床药理 2010(05)
    • [29].黄芪多糖对体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医 2009(03)
    • [30].VEGF对体外培养的脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响[J]. 心脏杂志 2008(06)

    标签:;  ;  ;  ;  ;  

    PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞NF-κB信号的影响
    下载Doc文档

    猜你喜欢