KISS-1和MMP-9在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

论文摘要

目的：侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征之一。抑癌基因的失活和癌基因的活化是导致肿瘤增殖失控，恶性生长，侵袭和转移的基础。根据肿瘤侵袭发展的理论，肿瘤在侵袭过程中需要多次穿过由Ⅳ型胶原层粘连蛋白（LN）和纤维连接蛋白（FN）等组成的基底膜。在参与破坏基底膜的各种蛋白酶中，基质金属蛋白酶（MMPs）是最重要的一类，其中又以基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与肿瘤侵袭转移的关系最为密切。Kiss-1基因是1997年Lee等人在黑色素瘤中发现的一个新的肿瘤转移抑制基因。研究发现Kiss-1的表达水平与人黑色素瘤、乳腺癌的转移能力呈负相关。本实验主要研究肿瘤转移抑制基因Kiss-1和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在膀胱移行细胞癌中的表达情况，探讨它们的临床意义以及Kiss-1与MMP-9的相关性。方法：随机选取我院2004～2006年手术切除的40例膀胱移行细胞癌住院患者术后存档石蜡标本。其中男30例，女10例；按临床分期浅表肿瘤16例，浸润性肿瘤24例（T29例、T310例、T45例）；病理分级G113例、G214例、G313例，取正常膀胱组织10例作为本实验正常对照，采用免疫组织化学（SP）法技术对40例膀胱癌手术标本中Kiss-1和MMP-9的表达进行观察，探讨它们与膀胱移行细胞癌侵袭和转移的关系。所有数据输入计算机，用统计软件SPSS13.0处理，计算资料行X2检验。结果：1．正常膀胱粘膜上皮中，Kiss-1、MMP-9均为阴性表达。膀胱癌标本中，Kiss-1阳性表达17例，阳性率为42.5％。浸润性膀胱癌组（TNM分期为T2T3T4期）5例，其Kiss-1表达阳性率低于浅表性膀胱癌组（5对12，P＜0.05）。高分化组膀胱癌与中低分化组膀胱癌间，Kiss-1表达有显著差异（G110，G24,G33，P＜0.05），中低分化组间表达无差异（P＞0.05）。2．膀胱癌标本中，MMP-9的阳性表达23例，阳性率为57.5％。浸润性膀胱癌组18例，其MMP-9表达阳性率高于浅表性膀胱癌组（18对5，P＜0.05），高中分化组膀胱癌与低分化组膀胱癌间，MMP-9表达有显著差异（G15，G26，G3 12，P＜0.05），高中分化组间表达无差异（P＞0.05）。MMP-9主要位于肿瘤细胞浆内，且阳性细胞在肿瘤上皮与间质的交界处分布较多。3．膀胱癌中Kiss-1、MMP-9表达相关性分析：两者无相关性（P＞0.05）。讨论：1997年Lee等人在黑色素瘤中发现一个新的肿瘤转移抑制基因命名为Kiss-1基因。Kiss-1基因位于Iq32，有4个外显子，1、2外显子不翻译，第3外显子5’端38碱基后有转录起始位点和100个编码碱基。第4外显子有332个编码碱基和终止密码子。Kiss-1基因编码164个氨基酸的亲水蛋白含一个蛋白激酶C的二磷酸化位点和富脯氨酸功能区。Kiss-1基因在正常心脑、肝肺和骨骼中表达，在肾脏和胰腺中微量表达，在胎盘中高表达。Lee等人将Kiss-1基因转染乳腺癌MDA-MB-435细胞系，观察对照组和实验组裸鼠成瘤和自发性转移情况，结果表明Kiss-1基因不影响成瘤性，但能够抑制95％的肿瘤转移。本实验中，Kiss-1在浅表性膀胱癌组表达阳性率高于浸润性膀胱癌组。高分化组膀胱癌与中低分化组膀胱癌间的Kiss-1表达有显著差异，中低分化组间表达无差异。以上结果提示Kiss-1可能与膀胱移行细胞癌浸润和转移有关，可能是膀胱移行细胞癌的一个转移抑制基因。肿瘤细胞的浸润和转移是一个复杂的过程。首先要降解细胞外基质及基底膜，这一过程主要依赖于蛋白水解酶。MMPs（matrix metalloproteniase）就是这种锌离子依赖性内肽酶，它能降解细胞外基质所有成分。MMP-9是MMPs中降解基底膜最重要的蛋白酶之一。在组织中MMP-9以酶原的形式由细胞分泌产生，被各种活化因子激活，进而发挥酶解效应。研究发现，在肿瘤的侵袭和转移中MMP-9扮演了重要角色。由于某些致癌因子的作用，机体内源性调控MMPs的机制被破坏，使得MMP-9等蛋白酶在肿物组织中大量存在，它们发挥降解细胞外基质的酶解作用，促进肿瘤向周围生长。近年来，国内外学者在许多肿瘤组织包括膀胱癌中都发现有较高的MMP-9的表达，并且其表达程度与肿瘤的侵袭性有关。我们也在实验中证实，膀胱癌组织中有较高的MMP-9的表达，并且MMP-9在与肿瘤间质交界的瘤细胞浆内分布较高，说明这是MMP-9发挥酶解作用的主要场所。同时，MMP-9的阳性表达与膀胱癌的分期分级有关。MMP-9表达阳性率在浸润性膀胱癌组高于浅表性膀胱癌组，高中分化组膀胱癌与低分化组膀胱癌间MMP-9表达有显著差异。以上结果提示MMP-9可能与膀胱移行细胞癌的浸润和转移有关。Yan等人选择了6个MMP-9表达阳性／Kiss-1基因表达缺失的细胞系，经转染在HT-1080细胞系中获得了Kiss-1基因的稳定表达。在该细胞系中MMP-9酶活性下降并伴随侵袭能力的下降。在进一步研究中表明，Kiss-1基因通过降低NF-KappaB转录因子与MMP-9启动子的结合而降低MMP-9的蛋白水解酶作用。本实验随膀胱移行细胞癌病理分级升高，MMP-9表达呈上升趋势而Kiss-1表达呈下降趋势。可以推测Kiss-1对MMP-9在膀胱癌中的表达也有一定抑制作用。结论：1．临床检测组织标本中Kiss-1表达水平对于评价膀胱癌的预后具有一定意义。2．MMP-9对于膀胱癌侵袭和发展及恶性分化有着重要影响。临床检测组织标本中MMP-9表达水平对于评价膀胱癌的预后具有重要意义。3．随着膀胱癌分级升高，Kiss-1表达呈下降趋势而MMP-9表达呈上升趋势。在蛋白水平上，两者无相关性，这也为Yan等关于Kiss-1对MMPs家族的抑制是在基因水平而非蛋白水平的抑癌机制提供了一定依据。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 一、缩略语表
• 二、论文正文
• 1.前言
• 2.对象和方法
• 3.结果（附表、图）
• 4.讨论
• 5.结论
• 三、参考文献
• 四、综述
• 五、硕士在学期间发表文章
• 六、致谢