一氧化氮对体外培养猪腔前卵泡生长发育的影响

论文摘要

腔前卵泡是哺乳动物卵泡发育的早期阶段,但大量的腔前卵泡在发育到有腔卵泡前发生闭锁、退化,没有得到充分利用,这无疑是动物遗传与繁育资源的极大损失。哺乳动物腔前卵泡的体外培养的研究有助于揭示卵泡发育的过程及其机制,可以最大限度利用卵巢资源促进动物繁殖,保护濒临灭绝物种以及人类生殖健康。近年来的研究表明,NO作为一种信号分子,在哺乳动物生殖系统尤其是卵泡的生长发育调控方面具有非常重要的作用,如参与卵泡发育、卵母细胞成熟、排卵及性激素合成等。本试验以NCSU23为基础培养液,添加7.5%FBS、2.5mg/mlFSH、3.5μg/ml胰岛素、10μg/ml转铁蛋白和100μg/ml抗坏血酸培养直径200-300μm猪腔前卵泡,用不同浓度的NO供体硝普钠（sodium ntitroprusside,SNP）（0mmol/L、0.001 mmol/L、0.01mmol/L、0.1 mmol/L和1 mmol/L）处理,观察卵泡存活、成腔及卵泡直径变化,并研究培养后的卵泡卵母细胞发育及卵泡颗粒细胞凋亡情况。结果表明:（1）SNP各处理组卵泡在培养过程中直径变化差异不显著（p＞0.05）;（2）卵泡存活率在体外培养后表现差异,在培养第2天和第4天,0.001mmol/L SNP组显著高于1mmol/L SNP组卵泡存活率（85.28%vs70.6%,P＜0.05）,与其它各组差异不显著;（3）各SNP处理组卵泡成腔率,在第2天各组差异不显著,在第4天以0.001mmol/L SNP组最高（为79.81%）,且显著高于1 mmol/L SNP组（79.81%vs55.22%,P＜0.05）,与其他各组差异不显著;（4）培养结束后的卵母细胞正常率,除1mmol/L SNP组显著低于0.001 mmol/L SNP组（P＜0.05）外,其余各组间差异不显著（P＞0.05）,但以0.001 mmol/L SNP组卵母细胞正常率最高,为50.93%;在COC（cumulus oocyte complexes,COCs）回收率方面,0.001 mmol/L SNP组显著高于包括对照组的其余各处理组（P＜0.05）;（5）SNP各处理组卵泡颗粒细胞凋亡率,1mmol/L SNP组显著高于其余各组（P＜0.05）,0.001 mmol/L SNP组显著低于其余各组（P＜0.05）。以上结果表明,猪腔前卵泡生长发育过程中,NO对卵泡存活、腔的形成、卵母细胞正常发育以及颗粒细胞的凋亡有一定的调节作用。在实验研究范围内,低浓度的起促进作用,高浓度的起抑制作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 文献综述
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器、耗材
• 1.4 试剂配制方法
• 1.5 腔前卵泡的分离和选择
• 1.6 腔前卵泡的培养
• 1.7 各项指标的判断标准
• 1.8 试验设计
• 1.9 统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 SNP对体外培养腔前卵泡生长的影响
• 2.2 SNP对体外培养腔前卵泡存活率的影响
• 2.3 SNP对体外培养腔前卵泡成腔率的影响
• 2.4 SNP对体外培养腔前卵泡卵母细胞正常率以及COC回收率的影响
• 2.5 SNP对体外培养腔前卵泡颗粒细胞凋亡的影响
• 3 讨论
• 3.1 NO对体外培养腔前卵泡生长的影响
• 3.2 NO对体外培养腔前卵泡存活的影响
• 3.3 NO对体外培养腔前卵泡成腔的影响
• 3.4 NO对腔前卵泡体外卵母细胞形态正常和COC回收率的影响
• 3.5 NO对体外培养腔前卵泡颗粒细胞凋亡的影响
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介