本文主要研究内容
作者吕换男（2019）在《‘金坠梨’和‘鸭梨’差异表达蛋白PbTM9SF3的功能研究》一文中研究指出：梨属于蔷薇科（Rosaceae）配子体自交不亲和性果树,而‘金坠梨’是由自交不亲和的‘鸭梨’芽变而来,是自交亲和性品种。前人研究表明,非S因子的突变导致了‘金坠梨’的自交亲和。但导致‘金坠梨’自交亲和性突变的非S因子及其作用机制均尚未有报道。因此,本研究中以‘鸭梨’和‘金坠梨’为试材,采用蛋白质组学技术,在‘金坠梨’中筛选出了与自交不亲和性相关的基因PbTM9SF3。首先,对PbTM9SF3基因进行了系统的生物信息学分析,同时并采用qRT-PCR技术对其进行了时空表达分析;其次,对PbTM9SF3基因进行了亚细胞定位;最后,通过酵母互作实验验证PbTM9SF3基因的功能,获得了如下研究结果:1.利用iTRAQ技术对‘鸭梨’和‘金坠梨’花粉蛋白进行测序,筛选出489个差异表达蛋白,其中上调表达149个,下调表达340个。生物信息学分析表明,差异表达蛋白主要参与一些代谢途径。从差异表达蛋白中筛选出PbTM9SF3基因,设计引物并在‘金坠梨’中克隆PbTM9SF3基因,其核苷酸序列全长为1782 bp。PbTM9SF3基因别称EMP70,属于一种跨膜超家族蛋白（TM9SF）。经蛋白结构域分析,PbTM9SF3基因含有1个大的非胞质区、9个跨膜区,推测其可能作为一种通道和运输小分子的运输器;由氨基酸序列比对可知,PbTM9SF3基因的序列在进化过程中高度保守;系统进化树分析表明,该基因与基因MdTM9SF3被聚类为一支,氨基酸序列同源性达98%2.实时荧光定量PCR研究发现,PbTM9SF3基因在‘金坠梨’花粉中的表达量远高于其叶片和花柱;在花粉中,‘金坠梨’的表达量远高于‘鸭梨’,表明PbTM9SF3基因与‘金坠梨’自交亲和性的改变有关。3.采用基因枪轰击的方法,将受控于CAMV 35s启动子的携带有GFP报告基因和PbTM9SF3基因的PEZS-NL载体瞬时转化进洋葱内表皮细胞中。在荧光显微镜下发现绿色荧光蛋白（GFP）存在于细胞质膜上,表明该蛋白是一个膜蛋白。4.为了验证PbTM9SF3基因在自交亲和反应中的功能,从‘金坠梨’中克隆PbTM9SF3基因、PbS21-RNase基因和PbS34-RNase基因,采用酵母互作的方法研究PbTM9SF3蛋白与PbS21-RNase蛋白、PbS34-RNase蛋白是否发生互作。试验结果显示,与AD-PbTM9SF3、BD-PbTM9SF3两个质粒共转化的酵母菌不能正常生长,提示PbTM9SF3与两个S-RNase在酵母互作中不互作。
Abstract
li shu yu qiang wei ke （Rosaceae）pei zi ti zi jiao bu qin he xing guo shu ,er ‘jin zhui li ’shi you zi jiao bu qin he de ‘ya li ’ya bian er lai ,shi zi jiao qin he xing pin chong 。qian ren yan jiu biao ming ,fei Syin zi de tu bian dao zhi le ‘jin zhui li ’de zi jiao qin he 。dan dao zhi ‘jin zhui li ’zi jiao qin he xing tu bian de fei Syin zi ji ji zuo yong ji zhi jun shang wei you bao dao 。yin ci ,ben yan jiu zhong yi ‘ya li ’he ‘jin zhui li ’wei shi cai ,cai yong dan bai zhi zu xue ji shu ,zai ‘jin zhui li ’zhong shai shua chu le yu zi jiao bu qin he xing xiang guan de ji yin PbTM9SF3。shou xian ,dui PbTM9SF3ji yin jin hang le ji tong de sheng wu xin xi xue fen xi ,tong shi bing cai yong qRT-PCRji shu dui ji jin hang le shi kong biao da fen xi ;ji ci ,dui PbTM9SF3ji yin jin hang le ya xi bao ding wei ;zui hou ,tong guo jiao mu hu zuo shi yan yan zheng PbTM9SF3ji yin de gong neng ,huo de le ru xia yan jiu jie guo :1.li yong iTRAQji shu dui ‘ya li ’he ‘jin zhui li ’hua fen dan bai jin hang ce xu ,shai shua chu 489ge cha yi biao da dan bai ,ji zhong shang diao biao da 149ge ,xia diao biao da 340ge 。sheng wu xin xi xue fen xi biao ming ,cha yi biao da dan bai zhu yao can yu yi xie dai xie tu jing 。cong cha yi biao da dan bai zhong shai shua chu PbTM9SF3ji yin ,she ji yin wu bing zai ‘jin zhui li ’zhong ke long PbTM9SF3ji yin ,ji he gan suan xu lie quan chang wei 1782 bp。PbTM9SF3ji yin bie chen EMP70,shu yu yi chong kua mo chao jia zu dan bai （TM9SF）。jing dan bai jie gou yu fen xi ,PbTM9SF3ji yin han you 1ge da de fei bao zhi ou 、9ge kua mo ou ,tui ce ji ke neng zuo wei yi chong tong dao he yun shu xiao fen zi de yun shu qi ;you an ji suan xu lie bi dui ke zhi ,PbTM9SF3ji yin de xu lie zai jin hua guo cheng zhong gao du bao shou ;ji tong jin hua shu fen xi biao ming ,gai ji yin yu ji yin MdTM9SF3bei ju lei wei yi zhi ,an ji suan xu lie tong yuan xing da 98%2.shi shi ying guang ding liang PCRyan jiu fa xian ,PbTM9SF3ji yin zai ‘jin zhui li ’hua fen zhong de biao da liang yuan gao yu ji xie pian he hua zhu ;zai hua fen zhong ,‘jin zhui li ’de biao da liang yuan gao yu ‘ya li ’,biao ming PbTM9SF3ji yin yu ‘jin zhui li ’zi jiao qin he xing de gai bian you guan 。3.cai yong ji yin qiang hong ji de fang fa ,jiang shou kong yu CAMV 35sqi dong zi de xie dai you GFPbao gao ji yin he PbTM9SF3ji yin de PEZS-NLzai ti shun shi zhuai hua jin xiang cong nei biao pi xi bao zhong 。zai ying guang xian wei jing xia fa xian lu se ying guang dan bai （GFP）cun zai yu xi bao zhi mo shang ,biao ming gai dan bai shi yi ge mo dan bai 。4.wei le yan zheng PbTM9SF3ji yin zai zi jiao qin he fan ying zhong de gong neng ,cong ‘jin zhui li ’zhong ke long PbTM9SF3ji yin 、PbS21-RNaseji yin he PbS34-RNaseji yin ,cai yong jiao mu hu zuo de fang fa yan jiu PbTM9SF3dan bai yu PbS21-RNasedan bai 、PbS34-RNasedan bai shi fou fa sheng hu zuo 。shi yan jie guo xian shi ,yu AD-PbTM9SF3、BD-PbTM9SF3liang ge zhi li gong zhuai hua de jiao mu jun bu neng zheng chang sheng chang ,di shi PbTM9SF3yu liang ge S-RNasezai jiao mu hu zuo zhong bu hu zuo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自河北科技师范学院的吕换男，发表于刊物河北科技师范学院2019-07-08论文，是一篇关于金坠梨论文,自交不亲和性论文,花粉论文,河北科技师范学院2019-07-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自河北科技师范学院2019-07-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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