STAT1 siRNA对人气道上皮细胞STAT1及ICAM1蛋白表达的影响

论文摘要

目的：信号转导与转录激活因子1（signal transducer and activa tor of transcription 1,STAT1）是STAT家族中第一个被发现的转录因子,为先天性免疫所必需。干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）等细胞因子通过Janus激酶-信号转导子与转录激活子（Janus kinases-si gnal transducers and activators of transcription,JAK--STAT）途径激活STAT1而诱导目的基因表达、参与细胞因子介导的信号转导过程、导致气道的炎症和高反应性,支气管哮喘气道炎症常与气道上皮细胞STAT1途径的信号传导异常有关。细胞间粘附分子1（Interc ellular Adhesion Molecule-1,ICAM-1）为免疫球蛋白超基因家族成员,属于急性期反应蛋白,可增加气道内嗜酸性粒细胞浸润及气道高反应性。活化的STAT1入核并与相关转录共同活化子结合,相互作用增强基因的转录,导致ICAM1表达增加。本实验应用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术探讨沉默STAT1基因对STAT1及ICAM1蛋白表达的影响,探讨其对气道炎症的抑制作用。方法：培养人支气管上皮细胞（16HBE）,分为：（1）IFN-γ刺激16HBE细胞后30min组；（2）正常细胞组；（3）pG-HK转染48h组：转染IFN-y刺激30min细胞并培养48h；（4）pGSTAT1转染48h组：pGSTAT1转染IFN-γ刺激30min细胞并培养48h；（5）pGSTAT1转染24h组：pGSTAT1转染IFN-γ刺激30min细胞并培养24h；（6）pGSTAT1转染72h组：pGSTAT1转染IFN-γ刺激30min细胞并培养72h。（4）、（5）、（6）三组细胞分别在显微镜下观察细胞形态,免疫荧光显微镜下观察荧光表达；（1）至（6）组细胞分别提取细胞总蛋白,免疫印迹法检测STAT1及ICAM1蛋白表达,Quantityone4.6.2软件分析条带相对灰度值,SPSS软件统计分析。结果：质粒转染细胞后,细胞生长状态良好,大部分细胞贴壁生长,细胞形态正常,未见细胞毒性,转染后48h转染效率最高,达58.21%；IFN-γ刺激后30min组STAT1蛋白相对含量明显高于正常细胞组（P<0.05）,与pGHK组细胞STAT1蛋白表达差异无显著性（P=0.384）,pGSTAT1转染IFN-γ刺激30min的16HBE细胞,能明显下调细胞STAT1蛋白表达水平,与IFN-γ刺激后30mi组细胞蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05）,STAT1蛋白相对含量明显低于pG-HK组,差异有显著性（P<0.05）,与正常细胞组比有显著性（P<0.05）；IFN-γ刺激后30min组ICAM1蛋白相对含量明显高于正常细胞组（P<0.05）,与pGHK组细胞ICAM1蛋白表达差异无显著性（P=0.754）,pGSTAT1转染细胞后能明显下调ICAM1蛋白表达,与IFN-γ刺激后30min组细胞ICAM1蛋白表达差异有显著性（P<0.05）,与pGHK组细胞ICAM1蛋白表达差异有显著性（P<0.05）,与正常细胞组相比差异无显著性（P>0.05）。pGSTAT1转染干扰素刺激细胞24h、48h、72h后STAT1与ICAM1蛋白相对含量直线相关分析提示两种蛋白之间存在正相关（r=0.941,P<0.05）。结论：1.本实验室前期构建的STAT1靶向RNA干扰重组体,能够高效转染人气道上皮细胞；2.IFN-γ刺激16HBE细胞30min可以引起STAT1表达增加；3.pGenesil-shRNA-STAT1重组质粒可以有效抑制STAT1及ICAM1蛋白表达,有望成为治疗哮喘的新方法；4.STAT1与ICAM1下降呈高度正相关,提示STAT1参与ICAM1的调控。

论文目录

• 1 STAT1 siRNA对人气道上皮细胞STAT1及ICAM1蛋白表达的影响
• 1.1 中文摘要
• 1.2 英文摘要
• 1.3 前言
• 1.4 材料与方法
• 1.5 结果
• 1.6 讨论
• 1.7 结论
• 1.8 参考文献
• 1.9 英汉缩略词对照表
• 2 致谢
• 3 RNA干扰与呼吸系统疾病治疗（综述）