模拟人微卫星DNA的寡核苷酸对人免疫细胞活化的抑制作用

论文摘要

免疫抑制性寡核苷酸(ODN)是人工合成的具有特定核苷酸顺序的单链DNA分子,它能抑制由病原体感染所引起的过度的、有害的免疫反应,维持机体的免疫平衡状态,防止组织细胞受到损伤。免疫抑制性ODN在自身免疫性疾病、器官移植排斥和超敏反应等方面具有广泛的应用前景。我们采用免疫抑制性ODN的筛选平台,对自行设计并合成的101条ODN进行了筛选,得到一类模拟人类微卫星DNA的、具有广泛免疫抑制活性的ODN。在此基础上,我们对抑制活性最强的MS08的功能特点和作用机理进行了深入研究。结果表明,MS08能抑制由TLR9的配体CpG ODN诱导的人PBMC的免疫活化,该抑制作用与MS08和CpG ODN竞争细胞膜表面受体有关;此外,MS08还能抑制非TLR9介导的人PBMC的免疫活化。该研究不但首次从免疫学角度分析了人类微卫星DNA的生物学作用,而且MS08还有望开发成具有独立知识产权的新型免疫调节性药物。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 前言
• 文献综述
• 1 DNA
• 1.1 DNA 的分子结构
• 1.2 DNA 的体内复制和体外合成
• 1.3 细胞对胞外DNA 的结合与摄入
• 1.4 细胞内识别DNA 的受体
• 2 免疫刺激性ODN
• 2.1 CpG 基序的发现
• 2.2 CpG ODN 的作用机理
• 2.3 CpG ODN 的应用
• 3 免疫抑制性ODN
• 3.1 抑制性ODN 的发现
• 3.2 抑制性ODN 的来源和序列特点
• 3.3 抑制性ODN 的作用机理
• 3.4 抑制性ODN 的分类
• 3.5 抑制性ODN 的应用
• 4 微卫星DNA
• 4.1 微卫星DNA 概述
• 4.2 微卫星DNA 的长度多态性
• 4.3 微卫星DNA 的生物学功能
• 5 Toll 样受体与自身免疫性疾病
• 5.1 固有免疫与获得性免疫
• 5.2 Toll 样受体家族
• 5.3 TLR 与自身免疫病的发生
• 材料与方法
• 1 主要材料
• 1.1 ODN 的合成
• 1.2 细胞和细胞株
• 1.3 实验动物
• 1.4 病毒
• 1.5 试剂
• 2 主要方法
• 2.1 人PBMC 的分离及培养
• 2.2 小鼠脾细胞的分离及培养
• 3H-TdR 掺入法测定细胞增殖'>2.3³H-TdR 掺入法测定细胞增殖
• 2.4 PI 染色法检测人PBMC 细胞周期
• 2.5 双向混合淋巴细胞反应
• 2.6 病毒的培养和灭活
• 2.7 VSV 病毒保护实验
• 2.8 细胞表面协同刺激分子水平的测定
• 2.9 检测细胞对ODN 的结合与摄入情况
• 2.10 结合MS ODN 的淋巴细胞型别分析
• 2.11 共聚焦显微摄影
• 2.12 统计分析
• 实验结果
• 1 抑制性ODN 的初步筛选
• 1.1 抑制性ODN 筛选平台的建立
• 1.2 第一批抑制性ODN 的设计和筛选
• 1.3 第二批抑制性ODN 的设计和筛选
• 1.4 第三批抑制性ODN 的设计和筛选
• 1.5 抑制性ODN 筛选平台的优化
• 1.6 SAT05f 对人PBMC 细胞周期和形态学的影响
• 1.7 VSV 病毒保护实验方法的建立
• 1.8 SAT05f 抑制CpG ODN 诱导的抗病毒活性
• 2 模拟人微卫星DNA 的ODN（MS ODN）的免疫抑制活性
• 2.1 MS ODN 对CpG ODN 诱导人PBMC 增殖的抑制作用
• 2.2 MS08 抑制作用的浓度相关性
• 2.3 MS08 抑制B 型和C 型CpG ODN 诱导的人PBMC增殖
• 2.4 低浓度MS08 刺激人PBMC 增殖
• 2.5 MS08 抑制A 型和C 型CpG ODN 诱导的抗病毒活性
• 2.6 MS08 抑制CpG ODN 诱导的协同刺激分子的表达
• 2.7 MS08 抑制HSV-1 和PR8-Flu 诱导的抗病毒活性
• 2.8 MS08 抑制PHA 和PMA 诱导的人PBMC 增殖
• 2.9 MS08 抑制人PBMC 的双向混合淋巴细胞反应
• 3 MS08 抑制CpG ODN 的作用机理与作用特点
• 3.1 MS08 抑制人PBMC 对CpG ODN 的结合与摄入
• 3.2 MS08 与BW006 对细胞结合与摄入的竞争
• 3.3 MS08 与CpG ODN 竞争细胞表面同一受体
• 3.4 不同时间点加入MS08 对其抑制效果的影响
• 3.5 MS08 和CpG ODN 预处理对人PBMC 活性的影响
• 3.6 MS08 的结构与功能分析
• 3.7 MS08 的种属特异性分析
• 讨论
• 1 人类微卫星DNA 的免疫抑制活性
• 2 抑制性ODN 筛选平台的合理性
• 3 MS ODN 抑制非TLR9 介导的免疫活化
• 4 低浓度MS08 刺激人PBMC 增殖
• 5 MS ODN 与CpG ODN 的相互关系
• 6 免疫细胞表面存在MS ODN 与CpG ODN 的共用受体
• 7 TC 串联重复序列的生物来源和作用特点
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表的学术论文及其他成果
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢
• 个人简历