泽泻汤对血脂调节的胆固醇相关基因mRNA表达变化研究

论文摘要

目的：从中医学的角度出发,高血脂症的发病机制是本虚标实,本虚的临床症状主要是脾胃气虚和肝肾阴虚,标实的临床症状表现为血瘀痰浊。高脂血症的痰浊的产生与脾虚有着非常密切的联系,其病机特点为中虚不运水液,水湿之邪上冒清阳,从而导致病人苦于头目眩晕。所以二者同源异流,因而可以用来治疗支饮的泽泻汤也适用于治疗高脂血症,这实际上属于“异病同治”,用该方治疗高脂血症符合中医基础理论。现代药理学和临床研究表明泽泻汤具有非常显著的调节血脂异常作用,对高脂血症有很好的疗效。目前对泽泻汤降脂方面的研究还比较少见,现有的已经阐述的机理有：影响机体吸进外源性胆固醇,或者是干扰机体对内源性胆固醇的分解代谢以及干扰机体的抗脂质过氧化作用。这也体现了泽泻汤对血脂代谢疾病的多途径多靶点的整体治疗作用效果。但是从分子生物学角度来研究泽泻汤的调血脂作用机理,却仍然处于摸索阶段。在实验中利用高脂饲料来造高血脂小鼠实验模型,通过观察肝脏组织病理形态学上的变化以及测定血清谷草转氨酶（AST）以及谷丙转氨酶（ALT）含量多少从而研究高血脂小鼠肝功能损伤的程度；利用反转录聚合酶（RT-PCR）反应方法,测定肝组织中3-羟-3-甲基戊二酰酶A还原酶（HMG-CoA reductase）的表达情况,固醇反应元件结合蛋白因子-2（SREBF-2）,7α羟化酶（CYP7α1）一些与胆固醇代谢有关的基因在机体内的表达情况以及活性,从而研究高血脂小鼠肝脏脂质物质代谢紊乱的分子作用机理。方法：选取雄性昆明小鼠,实验前用普通饲料常规适应饲养1w小鼠；之后随机分8只为第1组（空白对照组）继续给予普通饲料,对其余40给予高脂饲料进行高脂造模,3w末尾静脉取血分离血清,用半自动生化仪检测血脂,若血脂水平升高则说明造模成功,随机将造模成功的所有小鼠分为5组,每组均为8只。造模成功后各组以0.01m1·g-1的剂量对小鼠进行灌胃,每日1次连续4w。（1）空白对照组：给予普通饲料,灌胃时包含生理盐水；（2）模型对照组：给予普通饲料,灌胃时包含生理盐水；（3）阳性对照组：给予高脂饲料同时以6.7mg·kg-1辛伐他汀灌胃；（4）泽泻组：给予高脂饲料同时以2g·ml-1泽泻单方溶液灌胃；（5）白术组：给予高脂饲料同时以2g·ml-1白术单方溶液灌胃；（6）复方组（泽泻：白术=5：2）：喂养高脂饲料同时以2g·ml-1泽泻汤复方溶液灌胃。各组小鼠均在独立的笼子中进行饲养,它们可以不受约束地饮水和摄食。实验期间经常观察小鼠的状态情况。需要灌胃的各组每日早上如上述所描述的进行。每周对各小组小鼠称重一次,根据每只小鼠的体重来调整相应的剂量。空腹,颈动脉采血,将获得的血清用于如下一些指标的测定：血清总胆固醇（TC）浓度、甘油三酯（TG）浓度、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量、ALT和AST浓度。肝脏用于组织切片、RNA及脂质提取,并在实验结束时测定脏器系数。2观察肝脏组织的形态和病理变化情况将摘取的肝组织首先进行照相,接着依次经过甲醛的固定,石蜡的包埋,切片,然后HE染色后,通过光镜来观察肝组织病理学上变化的情况。3提取肝脏中的总脂类物质成分首先按照试剂盒说明书上所给出的步骤提取出肝脏总脂,然后测定肝脏中的胆固醇。4测定血清中的胆固醇相关指标、肝脏中的胆固醇通过RT-9600型全自动生化分析仪来测定血脂、血清ALT和血清AST这些指标。5测定肝脏组织中血脂相关的一系列基因mRNA的相对表达量用两步法提取总RNA,以(β-Actin作为内参,用RT-PCR法测定HMG-CoA reductase, SREBF-2和CYP7α1 mRNAs的相对表达量。结果：1.泽泻、白术和复方降低血清中胆固醇相关指标作用情况与模型组相比,泽泻组和复方组中小鼠血清中TG和TC浓度都出现显著性地降低,同时血清HDL-C浓度显著增加,泽泻、白术和复方组小鼠血清ALT、AST活性增加,具有统计学意义；泽泻、白术、复方均能不同程度降低小鼠肝脏、脾脏系数；灌胃4w后,与泽泻组相比,复方能显著降低小鼠体重,并且能显著降低小鼠肝脏系数。2.泽泻、白术和复方对肝组织中胆固醇相关一系列基因mRNA相对表达量的影响情况。当高血脂症时,一系列与胆固醇代谢有关的基因表现出异常表达。其中,高血脂症小鼠肝HMG-CoA reductase的激活伴随着SREBF-2的激活。但是,高血脂症小鼠肝中的7A羟化酶基因的表达没有被激活。泽泻和复方组都表现出胆固醇代谢有关的基因异常表达。在我们实验条件下,泽泻和复方均降低了血清TC的水平,同时相应的也激活了小鼠肝中HMG-CoA reductase表达。与泽泻组相比,复方也激活了小鼠肝中SREBF-2的表达。但是,泽泻和复方均小鼠肝中的CYP7α1基因的表达没有被激活。白术对胆固醇代谢有关的所有基因表达影响不大,并且不具有统计学上的意义。与模型组相比,白术组小鼠肝的HMG-CoA reductase, CYP7α1和SREBF-2的mRNA相对表达量均没有显著性的改变。结论：1.泽泻汤组方合理,泽泻和白术联合使用具有协同降血脂作用。2.泽泻和复方的降脂机理可能是对肝脏中HMG-CoA reductase基因的表达起向下调控作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4. 讨论
• 5. 结语
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢