红三叶草总异黄酮提取、分离、纯化工艺研究

论文摘要

红三叶草也称红车轴草（Trifolium pretense）,为豆科三叶草属多年生草本植物。研究表明岷山红三叶不仅可以作为优良的牧草,而且是重要的药材,含有丰富的异黄酮类物质,如芒柄花素、鹰嘴豆芽素A、红车轴草素、大豆素等,具有大豆异黄酮类似的药用与保健作用.。本试验以岷山红三叶为材料,通过红三叶草粉末的乙醇浸提,乙醇粗提物的乙酸乙酯萃取,以及乙酸乙酯提取物的大孔树脂分离纯化等步骤,结合HPLC的分析检测手段,最终得到杂质大为减少异黄酮产品,异黄酮纯度达到50%以上。通过正交试验分析确定,影响红三叶异黄酮浸提回收率的关键因素是乙醇的浓度,影响异黄酮纯化的关键因素是盐酸的浓度,并最终选用乙醇和乙酸乙酯分别作为浸提和纯化的溶剂。乙醇浸提选用L3（34）正交实验,确定从红三叶草提取异黄酮的最佳工艺条件是:乙醇浓度75%,提取温度70℃,乙醇用量10倍（V/W）,浸提时间1小时。乙酸乙酯萃取也选用L3（34）正交实验,确定从乙醇浸膏得到异黄酮粗品的最佳工艺是:反应盐酸浓度3%,反应温度60℃,用于溶解浸膏的3%碱用量为4倍（V/W）,反应时间为1小时。对于乙酸乙酯提取物的进一步纯化。研究表明,AB-8树脂对红车轴草异黄酮不仅吸附量大,而且解吸率高,适合红车轴草异黄酮的分离富集。AB-8树脂分离红车轴草异黄酮的工艺参数为:上柱液浓度0.8-4mg/mL,pH8.5,流速2BV/h。以4-6倍树脂床体积的70-80%乙醇以2BV/h流速进行洗脱,可基本上将红车轴草异黄酮从树脂上解吸下来,收集其中浓度最集中部分,经HPLC检测,其异黄酮浓度超过50%,杂质大为减少,通过冷冻干燥就能得到含量达50%以上的异黄酮干品。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1.1 红三叶草及异黄酮简介
• 1.2 红三叶草异黄酮分离技术
• 1.3 本论文研究的目的和意义
• 第二章 材料与方法
• 材料: 红三叶草采自甘肃岷山
• 仪器和试剂
• 2.1 实验样地
• 2.2 岷山红三叶栽培技术
• 2.3 样品采集及处理
• 2.4 乙醇浸膏的提取
• 2.5 溶剂萃取法提取总异黄酮
• 2.6 用大孔树脂分离异黄酮初提物
• 2.7 色谱分析方法
• 2.8 红三叶草茎与叶的含量比较
• 第三章 结果
• 3.1 乙醇提取正交试验表
• 3.2 方差分析表
• 3.3 萃取正交实验表
• 3.4 方差分析表
• 3.5 HPLC图谱
• 3.6 质谱图
• 3.7 吸附及解吸附曲线
• 第四章 讨论
• 4.1 红车轴草总异黄酮浸提工艺的影响因素
• 4.2 红车轴草异黄酮纯化工艺的影响因素
• 4.3 HPLC分析，纯化异黄酮的几个问题
• 4.4 单体提取物与植物药提取物的区别与联系
• 参考文献
• 硕士期间所发文章整理及专利申请
• 致谢