端粒植入和端粒位置效应对胃癌细胞生物学行为的影响

论文题目: 端粒植入和端粒位置效应对胃癌细胞生物学行为的影响

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科学

作者: 巩艳

导师: 房殿春

关键词: 端粒,端粒酶,端粒植入,甲基化,荧光素酶报道基因,胃癌

文献来源: 第三军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 前言:胃癌的发生是一个由多基因改变、多种因素参与、并经历了多步骤的渐进过程,癌基因、抑癌基因、DNA 错配修复基因、细胞黏附分子、端粒/端粒酶、细胞周期调节因子和生长因子/受体系统等多个基因改变的积累参与了由正常上皮细胞转变成胃癌的过程。研究表明,端粒缩短和端粒酶活化参与了胃癌的发生。近来在酵母菌细胞发现,端粒可使其附近基因的表达发生“沉默”,这种现象称谓端粒位置效应(telomere position effect)。由于此效应的存在,导致染色体不稳定发生,引起细胞生物学特性的改变,使得细胞获得了恶性倾向[3,4]。鉴于端粒长度改变、端粒酶的活化与胃癌发生发展的密切的关系,为深入探讨端粒改变在胃癌发生中的作用,本实验拟将外源端粒片段植入胃癌细胞,观察外源端粒植入和端粒位置效应对细胞生物学活性的影响,同时观察对端粒长度和端粒酶活性、细胞周期调控相关基因表达和P16 和错配修复基因hMLH1甲基化状态的影响,希图进一步阐明染色体端粒结构和功能异常在胃癌发生发展中的作用,从全新的角度揭示胃癌的发生机理。一、目的:拟对端粒植入和端粒位置效应对胃癌细胞生物学行为、端粒长度,端粒酶活性、细胞生长相关基因表达、P16 和错配修复基因hMLH1 甲基化状态的影响进行观察,希图进一步阐明染色体端粒结构和功能异常在胃癌发生发展中的作用,从全新的角度揭示胃癌的发生机理。二、方法: 1) 采用新一代聚阳离子脂质体LipofectAMINTM2000 作为载体,首先将绿色荧光蛋白质粒转染入人胃癌细胞SGC7901 内,,证实转染成功且转染效率较高后,将含有端粒片段质粒pSX-T2AG3-neo 及空载体质粒转染入人胃癌细胞SGC7901 内,进一步经G418筛选形成细胞克隆,采用PCR 在基因水平鉴定外源性端粒片段在细胞内植入; 2) 采用TRAP 法检测转染细胞端粒酶活性变化; 3) 采用TRF 法检测转染细胞端粒长度变化; 4) 采用MTT 法检测细胞生长曲线; 5) 采用流式细胞仪测定细胞周期; 6) 采用Western blot 测定p53、p21、caspase-3 表达变化;

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论文正文 端粒植入和端粒位置效应对胃癌细胞生物学行为的影响

前言

参考文献

第一部分 胃癌7901 细胞含有端粒片段质粒的植入和鉴定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二部分 端粒植入细胞生长、端粒长度和端粒酶表达的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第三部分 端粒植入对细胞生长相关基因和错配修复基因的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第四部分 端粒位置效应研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

全文结论

致谢

照片

文献综述一 端粒位置效应与胃癌

参考文献

文献综述二 端粒、基因不稳定与胃癌

参考文献

攻读博士期间发表的文章

发布时间: 2005-11-08

参考文献

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