论文摘要
第一部分大鼠骨髓内皮祖细胞的分离、培养、鉴定目的：建立一种稳定可靠、纯度较高的SD大鼠骨髓内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs）分离、鉴定并诱导培养成血管内皮细胞的方法。方法：密度梯度离心法从大鼠骨髓中提取单个核细胞后转入预包被人纤维连接蛋白的培养瓶中，添加适宜浓度的3种生长因子共同诱导培养14d，进行形态学、免疫学（免疫细胞化学染色鉴定细胞表面抗原）、功能学（FITC-UEA-1与Dil-acLDL双荧光染色）鉴定。结果：倒置显微镜下可见贴壁细胞呈梭形、条索状、网格状排列，旋涡状、放射状、铺路石样生长。免疫细胞化学染色显示CD31、CD34、CD133、vWF、Flk-1在不同时段呈现不同的阳性表达率。激光共聚焦显微镜下见EPCs结合FITC-UEA-1（显示绿色荧光）并内吞Dil-acLD（显示红色荧光）显示黄色荧光（红绿两种荧光重合），即免疫双荧光染色阳性，该细胞被认为是正在分化的EPCs。结论： Percoll密度梯度离心法及贴壁筛选法经bFGF、EGF、VEGF共同诱导培养后可获得纯度较高的内皮祖细胞，该细胞具有内皮细胞特性，可体外诱导分化成血管内皮细胞。第二部分双特异抗体增效内皮祖细胞移植促进心肌血管新生目的：探讨在双特异抗体（Bispecific antibody，BiAb）的辅助下，内皮祖细胞移植可否更好的定向归巢大鼠缺血肌促进血管新生。方法：体外分离培养鉴定SD大鼠骨髓源性内皮祖细胞；开胸结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型；以抗肌凝蛋白轻链抗体（AMLCA，能特异性结合缺血心肌）和anti-CD34（能识别内皮祖细胞）两种抗体，化学交联法制备BiAb（CD34×AMLCA）。将此BiAb与EPCs经尾静脉输入心肌梗死大鼠（EPCs+BiAb组），另设EPCs组、BiAb组及对照组。细胞移植35d后M型超声心动图检测LVEF及FS以评价心功能，免疫组织化学法行5-Brdu及VIII因子检测，qRT-PCR及Western blot检测大鼠心肌VEGF的表达。结果：与其余组相比，EPCs+BiAb组射血分数及短轴缩短率增加，心梗区周围5-BrdU阳性细胞数及微血管密度增加，心肌VEGF mRNA与蛋白表达增加（P均<0.05）。结论：CD34×AMLCA可增效大鼠骨髓内皮祖细胞定向归巢到大鼠缺血心肌，更好的促进缺血心肌的血管修复与再生，改善心功能，为干细胞靶向移植提供一种新的途径。
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标签：大鼠论文; 骨髓论文; 内皮祖细胞论文; 细胞培养技术论文; 双特异抗体论文; 心肌梗死论文; 细胞移植论文; 归巢论文; 血管新生论文;