论文摘要
通过SWISS-PROT, GSC等蛋白序列数据库网站的查询,获得大豆蛋白、大豆7S球蛋白及11S球蛋白的氨基酸序列,补充到蛋白质数据库,搜索近年来国内外发表的关于ACE抑制肽的文献,更新ACE抑制肽数据库,以及从酶命名数据库中搜索、完善了更多的蛋白酶到蛋白酶数据库,并利用Visual Basic在“定向酶解制备活性肽分析系统”中添加疏水性氨基酸含量计算程序、双酶水解程序、预测潜在活性肽程序和水解片段分子量计算程序。利用疏水性氨基酸含量计算程序分析大豆蛋白、大豆7S和11S球蛋白,初步筛选合适的蛋白质,再结合“定向酶解制备活性肽分析系统”模拟水解,以水解出的活性肽段相对较多的碱性蛋白酶以及胃蛋白酶+胰蛋白酶对大豆分离蛋白以及大豆7S球蛋白进行水解。实验比较碱性蛋白酶与胃蛋白酶+胰蛋白酶水解大豆分离蛋白与大豆7S球蛋白水解产物ACE抑制活性的大小,结果显示,碱性蛋白酶水解物ACE抑制活性较胃蛋白酶+胰蛋白酶高,大豆分离蛋白与大豆7S球蛋白水解产物的ACE抑制活性相当。以大豆7S球蛋白的碱性蛋白酶水解产物做分子量分布,其重均分子量分布与模拟水解产物的重均分子量进行相关性分析,结果线性关系显著,相关性较好。以75%乙醇为洗脱液,采用DA201-C型大孔吸附树脂对水解液进行疏水性氨基酸的富集,产物疏水性提高2.26%,富集产物以200 mg/mL的浓度,1.0 mL的上样量,0.25 mL/min的流速,0.02 mol/L HAc-NaAc缓冲液（pH 4.0）通过Sephadex G-15分离,所得活性最高组分经半制备RP-HPLC分离后得到高抑制率的单一活性组分,其抑制率达到96.57%,经LC/MS鉴定可知,从原料蛋白中分离出的ACE抑制肽氨基酸序列可能含有Phe-Ser（FS）、Tyr-Ile（YI）或Tyr-Leu（YL）,其中Tyr-Leu在大豆7S球蛋白中所占比例为0.009396%。