抗ICAM-1单链抗体的制备及其生物学活性研究

抗ICAM-1单链抗体的制备及其生物学活性研究

论文摘要

炎症是机体的一种重要的基本病理过程。各种炎症虽然有其特殊性,但从局部的病理变化看来,它们有着不少共同点,即都是机体对致炎因子的损伤作用所产生的一种反应,最新的医学研究发现,当炎症的程度严重或发展成慢性炎症时,它可能导致肿瘤、心血管疾病、糖尿病、自身免疫性疾病以及与年龄相关的疾病(如关节炎、早老性痴呆病、骨质疏松症等)的发生。细胞间粘附分子-1(ICAM-1)作为重要的致炎因子,在炎症反应、免疫监督等过程中起着重要的作用。以上许多疾病过程中可见ICAM-1的异常表达,因此阻遏ICAM-1的表达为以上疾病的诊断和治疗提供了新的策略。本研究在已制备的抗ICAM-1单克隆抗体的基础上,从分泌该单抗的杂交瘤细胞株中克隆出VH和VL基因,组装成ScFv基因,将ScFv基因插入原核表达载体pET-22b(+)中,转化宿主菌中进行表达,之后对表达的包涵体进行了复性和纯化。最后通过体外细胞实验和体内动物实验检测ScFv抗体的生物学活性。细胞实验表明,制备的ScFv能有效地抑制内皮细胞与单核细胞之间的粘附;动物实验证明此ScFv对小鼠无菌性炎症有明显的抑制作用。本课题为进一步治疗炎症性疾病奠定了基础。

论文目录

  • 内容提要
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 单链抗体的研究进展及其应用
  • 1 单链抗体的结构
  • 2 单链抗体的特点
  • 3 单链抗体基因的来源和构建
  • 4 表达
  • 5 单链抗体活性的测定
  • 6 单链抗体的应用
  • 7 ScFv 存在问题及改进
  • 8 单链抗体的应用前景和展望
  • 第二章 细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的研究进展
  • 1 细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的生物学特点
  • 2 ICAM-1 的功能
  • 3 ICAM-1 与临床上疾病的关系
  • 4 抗黏附治疗
  • 5 展望
  • 第三章 包涵体柱色谱复性研究进展
  • 1 包涵体特点及形成
  • 2 包涵体的复性
  • 3 包涵体的色谱复性
  • 4 影响色谱复性的因素
  • 5 复性蛋白质的检测
  • 6 展望
  • 第二篇 实验内容
  • 第一章 抗ICAM-1 单链抗体原核表达载体的构建
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第二章 抗ICAM-1 单链抗体的原核表达、表达条件的优化及工程菌的发酵工艺研究
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第三章 抗ICAM-1 单链抗体的纯化及复性研究
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第四章 抗ICAM-1 单链抗体蛋白的生物学活性研究..
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 致谢
  • 导师简介
  • CURRICULUM VITAE
  • 相关论文文献

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