上海地区番茄黄化曲叶病毒病研究

论文摘要

番茄（Lycopersicon esculentum Miller）,属于茄果类番茄属,原产秘鲁厄瓜多尔一带的喜温植物。番茄适应性强,果实风味独特,营养丰富,世界各地广泛种植。番茄黄化曲叶病毒是一种由烟粉虱传播的双生病毒,在热带和亚热带发生严重,可以造成番茄的绝收。近年来其发病规模已经向世界范围内扩展,其发病趋势越来越重,因此必须找到一个行之有效的方法来解决这一问题。抗病育种一直以来被认为是解决病害问题最有效、最直接的方法。因此,本试验从开展病原鉴定入手,筛选出简单易行的苗期接种鉴定方法,在此基础上,对上海农科院园艺所番茄组提供的24份番茄材料进行了苗期番茄黄化曲叶病毒病的抗性鉴定,并建立了抗病基因的分子标记体系。为今后的番茄抗黄化曲叶病毒病育种工作奠定坚实的理论和实践基础。试验初步得到以下结论:1比较GenBank中已报到的烟粉虱传双生病毒DNA序列,根据其保守序列设计一对引物,在上海地区疑似感染双生病毒的番茄植株中PCR扩增得到一条575bp的特异带,通过克隆测序并在GenBank上比对,证实感染上海地区番茄的双生病毒为番茄黄化曲叶病毒。2建立了番茄黄化曲叶病毒病的烟粉虱接种法和嫁接接种法。并对24份材料的抗病性进行鉴定。筛选出免疫材料3份,抗病材料11份,为番茄抗黄化曲叶病毒病育种打下基础。3运用抗感材料筛选与番茄抗黄化曲叶病毒病基因相连锁的分子标记,结果获得1个与抗性基因相连锁的RAPD标记697。4建立了番茄Ty-1基因、Mi基因、Cf-5基因、Tm22基因的辅助选择体系,并首次建立了同时检测Ty-1和Mi双基因、同时检测Ty-1和cf-5双基因、同时检测Ty-1和Tm22双基因的双重PCR技术,所得结果与单引物检测所得结果一致,说明双重PCR检测体系可以用于番茄2个抗病基因的同时检测。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 文献综述
• 1 番茄黄化曲叶病毒病
• 1.1 番茄黄化曲叶病毒病的发生情况
• 1.2 病毒种类、结构
• 1.3 病毒检测
• 1.4 病毒传播介体及传播机制
• 1.4.1 病毒传播介体
• 1.4.2 烟粉虱传毒特性
• 1.5 番茄黄化曲叶病毒病的接种鉴定
• 1.6 番茄黄化曲叶病毒病的防治
• 2 番茄抗病分子育种研究进展
• 2.1 抗番茄黄化曲叶病毒病
• 2.2 抗番茄根结线虫病
• 2.3 抗叶霉病
• 2.4 抗番茄烟草花叶病毒
• 3 本研究的目的和意义
• 第一章 上海地区番茄黄化曲叶病毒病的分子鉴定及序列分析
• 1 材料与方法
• 1.1 毒原样品
• 1.2 菌株和质粒
• 1.3 常用生化试剂及仪器
• 1.4 番茄基因组DNA 提取、纯化及浓度检测
• 1.4.1 番茄基因组DNA 的提取
• 1.4.2 番茄基因组DNA 的纯化
• 1.4.3 番茄DNA 浓度的检测
• 1.5 病毒检测
• 1.5.1 引物的设计与合成
• 1.5.2 PCR 的扩增及检测
• 1.5.3 琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收
• 1.5.4 对回收的DNA 片段（5756p）进行克隆测序
• 1.6 序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 田间症状
• 2.2 提取的番茄DNA 的浓度与质量
• 2.3 PCR 扩增结果
• 2.4 扩增目的片段测序结果
• 2.5 序列分析
• 3 讨论
• 3.1 提取DNA
• 3.2 病毒的PCR 检测
• 第二章 番茄黄化曲叶病毒病接种方法研究及抗病性鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 番茄材料
• 1.2 病毒及传毒介体
• 1.3 试剂与仪器
• 1.4 番茄黄化曲叶病毒病接种方法研究
• 1.4.1 烟粉虱接种法
• 1.4.2 嫁接接种法
• 1.5 番茄黄化曲叶病毒病抗病性鉴定
• 2 结果与分析
• 2.1 烟粉虱接种法
• 2.2 嫁接接种法
• 2.3 番茄黄化曲叶病毒病抗病性鉴定
• 3 讨论
• 3.1 烟粉虱接种法
• 3.2 嫁接接种法
• 3.3 对接种方法的评价
• 第三章 番茄黄化曲叶病毒病分子标记及多重PCR 辅助育种
• 1 材料与方法
• 1.1 供试材料
• 1.2 试剂与仪器
• 1.3 RAPD-PCR
• 1.3.1 引物
• 1.3.2 DNA 提取及引物筛选
• 1.4 CAPS 标记
• 1.4.1 引物
• 1.4.2 DNA 提取及CAPS 反应
• 1.5 同时检测两个基因的双重PCR 检测
• 1.5.1 同时检测Ty-1 基因和Mi 基因的双重PCR 检测
• 1.5.2 同时检测Ty-1 基因和cf-5 基因的双重PCR 检测
• 2基因的双重PCR 检测'>1.5.3 同时检测Ty-1 基因和Tm2²基因的双重PCR 检测
• 1.6 辅助育种
• 2 结果与分析
• 2.1 Ty-1 基因的RAPD 标记
• 2.1.1 引物筛选
• 2.1.2 特异条带的测序
• 2.2 CAPS 标记
• 2.2.1 与Ty-1 基因紧密连锁特异标记片段的获得
• 2.2.2 与Mi 基因紧密连锁特异标记片段的获得
• 2.2.3 与cf-5 基因紧密连锁特异标记片段的获得
• 2基因紧密连锁特异标记片段的获得'>2.2.4 与Tm2²基因紧密连锁特异标记片段的获得
• 2.3 同时检测两个基因的双重PCR 检测
• 2.3.1 同时检测Ty-1 和Mi 基因双重PCR 技术的建立
• 2.3.2 同时检测Ty-1 和cf-5 基因双重PCR 技术的建立
• 2基因双重PCR 技术的建立'>2.3.3 同时检测Ty-1 和Tm2²基因双重PCR 技术的建立
• 2.4 利用双重PCR 技术对12 份番茄材料进行抗性鉴定
• 3 讨论
• 3.1 与Ty-1 基因相连锁的RAPD 标记
• 2 基因的辅助选择体系'>3.2 番茄Ty-1 基因、Mi 基因、Cf-5 基因、Tm2²基因的辅助选择体系
• 3.3 影响PCR 检测结果因素的讨论
• 3.3.1 PCR 产物的电泳检测时间
• 3.3.2 不出现扩增条带
• 3.3.3 电泳出现片状拖带或涂抹带
• 全文结论
• 1 建立了番茄黄化曲叶病毒病的PCR 检测方法
• 2 番茄黄化曲叶病毒病接种鉴定方法的建立
• 3 番茄黄化曲叶病毒病抗病性鉴定
• 4 番茄黄化曲叶病毒病抗病基因的RAPD 标记
• 5 抗病基因分子标记和多重PCR 体系建立与验证
• 参考文献
• 攻读硕士论文期间发表的文章
• 致谢