奶牛亚临床酮病诊断试纸条研制及其初步应用

论文摘要

酮病是奶牛主要的群发性、高发性疾病之一,其病理学基础是能量负平衡。本研究的目的是研制一种拥有自主知识产权的乳汁β-羟丁酸（β-hydroxybutyric acid,BHBA）分析试纸条,用于奶牛亚临床酮病的诊断,填补国内空白。根据生物有机化学显色法原理,建立了用于检测乳汁BHBA的试纸条的反应原理,对试剂及其配比、反应条件等分别进行了筛选、优化和确定。成功建立了可用于奶牛乳汁BHBA定量检测的紫外分光光度计检测方法,检测性能较好,与荧光法检测具有良好的相关性（r=0.9939）。所建立方法需要仪器比较常规、检测成本相对较低,是一种可用于乳汁BHBA定量检测的方法。依据试纸条反应原理及试剂配比,配制了试纸条的反应液,采用薄型中速定量滤纸、聚乙烯塑料胶板为材料成功的组装了试纸条。制作了试纸条的标准比色卡,以200μmol/L作为试纸条阳性结果判读标准。确定试纸条与被检样品反应的结果判读时间为反应3 min后。稳定性试验表明,组装的试纸条可在2-8℃条件下保存18个月检测性能不降低,符合国家食品与药品监督管理局关于临床体外诊断试剂的相关标准。所研制试纸条的特异性、敏感性和重复性较好。已于2007年申报国家发明专利（申请号:200710056031.9）,现正在起草乳汁BHBA分析试纸条的技术条件标准。以血液BHBA>1200μmol/L作为奶牛亚临床酮病的诊断标准,自制乳汁BHBA分析试纸条的检测敏感性和特异性与国外同类试纸条大致相当。自制试纸条和国外同类试纸条的价格比较结果表明自制乳汁BHBA分析试纸条的价格将远低于国外同类试纸条的售价。结合我国实际国情,自制乳汁BHBA分析试纸条具有广阔的应用前景和较大的经济价值。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 奶牛酮病及其诊断研究进展
• 1.1 酮病的概念
• 1.2 奶牛酮病病因学及发病机理
• 1.2.1 奶牛酮病病因学
• 1.2.2 发病机理
• 1.3 酮病的分类
• 1.3.1 I 型酮病
• 1.3.2 II 型酮病
• 1.3.3 临床酮病和亚临床酮病
• 1.4 酮病的发病率和流行性
• 1.5 酮病的动态变化
• 1.6 酮病与其它疾病、繁殖性能、产奶量和经济效益的相关性
• 1.6.1 酮病与其它产后初期疾病的相关性
• 1.6.2 酮病与繁殖性能的相关性
• 1.6.3 酮病与产奶量的关系
• 1.6.4 酮病引起的经济损失
• 1.7 奶牛酮病的诊断
• 1.8 奶牛酮病的监控程序
• 1.9 展望
• 第2章 医学酮体检测研究进展
• 2.1 酮体的代谢
• 2.2 糖尿病及糖尿病酮症酸中毒
• 2.3 医学酮体检测技术的发展
• 2.3.1 比色法
• 2.3.2 气相色谱法测定丙酮含量
• 2.3.3 分光光度法测定BHBA的含量
• 2.3.4 电化学生物传感器检测 BHBA
• 2.4 展望
• 第二篇 研究内容
• 第1章 奶牛亚临床酮病诊断试纸条设计
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 PMS 和黄递酶作为递氢体显色效果的比较
• 1.2.2 试纸条显色剂的选择
• 1.2.3 缓冲液种类的选择
• 1.2.4 缓冲液浓度的选择
• 1.2.5 缓冲液最适pH 的选择
• 1.2.6 试纸条组分最适配比的确定
• 1.2.7 增溶增敏剂对反应的影响
• 1.2.8 增溶增敏剂浓度的选择
• 1.2.9 金属离子的影响
• 1.3 讨论
• 1.3.1 PMS 和黄递酶对反应液及试纸条显色的影响
• 1.3.2 试纸条显色剂的选择
• 1.3.3 缓冲液种类、最适pH 的选择
• 1.3.4 试纸条组分最适配比的确定
• 1.3.5 增溶增敏剂对反应的影响
• 1.3.6 金属离子对反应的影响
• 1.3.7 温度对反应的影响
• 1.3.8 辅酶、辅基
• 1.4 小结
• 第2章 紫外分光光度法检测乳汁BHBA方法的建立
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试剂
• 2.1.2 仪器
• 2.1.3 奶样采集及前处理
• 2.1.4 标准溶液的配制
• 2.1.5 紫外分光光度法测定 BHBA 原理和检测溶液的制备
• 2.1.6 紫外分光光度法测定标准曲线的建立
• 2.1.7 样品测定
• 2.1.8 方法学评价
• 2.1.9 紫外分光光度法与荧光分光光度法测定的比较
• 2.1.10 数据统计分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 紫外分光光度法测定的标准曲线
• 2.2.2 线性范围、回收率、重复性、检测限
• 2.2.3 特异性试验结果
• 2.2.4 紫外分光光度法与荧光分光光度法测定的比较
• 2.3 讨论
• 2.3.1 显色剂与增容增敏剂
• 2.3.2 海藻糖对溶液的稳定作用
• 2.3.3 副反应的排除及方法学评价
• 2.3.4 与荧光分光光度法的比较
• 2.4 小结
• 第3章 奶牛亚临床酮病检测试纸条组装
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 材料和仪器
• 3.1.3 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 试纸条成品
• 3.2.2 试纸条比色卡
• 3.2.3 试纸条判读时间的确定
• 3.2.4 试纸条敏感性试验结果
• 3.2.5 试纸条特异性试验结果
• 3.2.6 试纸条重复性试验结果
• 3.2.7 试纸条稳定性试验结果
• 3.2.8 奶牛亚临床酮病诊断试纸条操作规程
• 3.3 讨论
• 3.3.1 塑料诊断胶板
• 3.3.2 高级滤纸
• 3.3.3 试纸条参数评价
• 3.4 小结
• 第4章 试纸条临床应用研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.1.3 亚临床酮病的诊断标准
• 4.1.4 自制试纸条的应用前景及经济效益分析
• 4.1.5 数据统计分析
• 4.2 结果
• 4.2.1 血清生化指标测定结果
• 4.2.2 乳汁分析试纸条、尿液分析试纸条和酮粉检测
• 4.3 自制试纸条的应用前景及经济效益分析
• 4.4 讨论
• 4.4.1 关于奶牛亚临床酮病的诊断
• 4.4.2 关于酮病的发病率
• 4.4.3 自制试纸条与 Ketolac 试纸条、酮粉和尿液分析试纸条检测
• 4.4.4 乳汁酮体检测的影响因素
• 4.4.5 乳汁 BHBA 分析试纸条的应用前景
• 4.4.6 酮病奶牛部分血液生化指标的变化
• 4.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻博期间主要研究成果
• 致谢
• 详细摘要
• Abstract
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