PPARγ拮抗剂发现及15d-PGJ2在PPARγ/TGFβ/Smad2通路中的调控作用研究

论文摘要

过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）是核受体家族中的一个非常重要的成员,它们在调节脂类和糖代谢平衡方面具有重要的功能。现在PPARγ已经作为一个重要的药物筛选靶标用于治疗糖尿病、炎症、坏脂血、高血压和癌症等。研究发现,相对于PPARγ的激动剂,PPARγ的拮抗剂和半激动剂在治疗糖尿病的过程中,除了能有效的保持胰岛素敏感性外,还表现出更小的副作用。因此,PPARγ拮抗剂具有更佳的成药价值。本文通过运用基于表面等离子共振（SPR）技术的Biacore体外筛选系统,我们发现二肽H-Trp-Glu-OH（G3335）与PPARγ具有很高的选择性结合活性,并且G3335可以抑制罗格列酮诱导增强的PPARγ/RXR相互作用。在此基础上,运用酵母双杂交和哺乳动物反式激活实验,进一步证实了G3335具有潜在的PPARγ拮抗活性。此外,同源模建和分子对接发现PPARγ的Cys285残基在G3335/PPARγ相互作用中具有非常重要的贡献,同时点突变实验也证实了这一点。因此,通过发现PPARγ拮抗剂G3335,

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 第一章 PPAR 拮抗剂研究进展
• 1 PPAR 的发现
• 2 PPAR 的结构和功能
• 3 PPAR 配体研究
• 4 PPAR 拮抗剂研究进展
• 4.1 GW0072
• 4.2 BADGE
• 4.3 LG100641
• 4.4 PD068235
• 4.5 GW9662
• 4.6 SR-202
• 4.7 T0070907
• 4.8 G3335
• 4.9 GW6471
• 5 PPAR 拮抗剂药物筛选方法
• 5.1 闪烁邻近实验
• 5.2 生物传感器检测
• 5.3 共激活物/共抑制物结合实验
• 5.4 哺乳动物反式激活实验
• 5.5 前脂肪细胞诱导分化实验
• 6 参考文献
• 第二章 PPARγ拮抗剂筛选评价系统建立及 PPARγ拮抗剂发现
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 PPARα（δ）-LBD、RXRα-LBD 和PPARγ-LBD-Cy5285Ala 蛋白表达质粒的构建
• 2.3 蛋白准备
• 2.3.1 PPARγ-LBD 蛋白表达纯化
• 2.3.2 RXRα-LBD 、PPARα-LBD 、PPARδ-LBD 和PPARγ-LBD-Cy5285Ala 蛋白表达纯化
• 2.4 表面等离子共振实验数据收集和分析
• 2.4.1 G3335/PPARγ-LBD 亲和活性分析
• 2.4.2 G3335/PPARα-LBD（PPARδ-LBD、PPARγ-LBD-Cys285Ala）亲和活性分析
• 2.4.3 PPARγ-LBD/RXRα-LBD 相互作用分析
• 2.5 酵母双杂交实验
• 2.5.1 酵母工程菌的构建
• 2.5.2 拮抗剂活性测定
• 2.5.3 α-半乳糖苷酶活性测定
• 2.6 哺乳动物反式激活实验
• 2.7 同源模建和分子对接
• 3 结果和讨论
• 3.1 G3335 为PPARγ的特异性配体
• 3.1.1 G3335 具有很高的 PPARγ亲和结合活性
• 3.1.2 G3335 具有选择性的PPARγ结合活性
• 3.1.3 PPARγ残基Cy5285在G3335/PPARγ结合中起重要作用
• 3.2 G3335 能够拮抗罗格列酮诱导的PPARγ-LBD/RXRα-LBD 相互作用
• 3.3 G3335 能够在酵母细胞水平上抑制罗格列酮诱导增强的PPARγ与共激活因子 CBP 的相互作用
• 3.4 哺乳动物反式激活实验
• 3.5 G3335/PPARγ-LBD 相互作用分子模建
• 4 结论
• 5 参考文献
• 第三章 PPARγ激动剂15d-PGJ2 在PPARγ/TGFβ/Smad2 信号通路中的调控作用研究
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 EGFP-Smad2 实验
• 2.3 哺乳动物细胞转染实验
• 2.4 Western blot 实验
• 2.5 图像数据的分析
• 3 结果和讨论
• 3.1 定量的研究TGFβ和15d-PGJ2 在调控PPARγ /TGFβ/Smad2 通路中的作用
• 3.1.1 TGFβ能够有效的激活Smad2 从细胞质转移到细胞核
• 3.1.2 15d-PGJ2 能够抑制TGFβ诱导的Smad2 转位作用
• 3.2 PPARγ在EGFP-Smad2 稳定表达细胞株中具有内在的表达
• 3.3 GW9662 能够减弱15d-PGJ2 对Smad2 转位的抑制活性
• 3.4 15d-PGJ2 在调控Smad2 转位时可能以一种不同于罗格列酮的方式激活PPARγ
• 4 结论
• 5 参考文献
• 本文缩写汇编
• 文章发表及获奖情况
• 致谢