中药提取（混合）物中TNFα拮抗剂筛选模型的建立及应用

论文摘要

药物筛选是药物发现最重要的环节之一。采用适当的模型、方法和技术手段对可能作为药用的物质就生理活性和药理作用进行检测,评价其药用价值是药物筛选的核心内容。在药物筛选中最关键的工作是建立具有一定灵敏度、特异性、稳定性和可操作性强的筛选模型。 TNF-α是能够引起肿瘤组织出血坏死、并具有多方面功能的细胞因子,涉及细胞生长调节、病毒复制、免疫系统调节、感染性休克、自体免疫疾病、类风湿性关节炎以及糖尿病等。能阻滞TNF-α的药物如可溶性受体、抗体等已分别被批准用于人的AIDS、类风湿性关节炎和炎症性肠疾病。 本文利用基因工程的方法克隆表达了TNF-α及其受体,建立了以筛选TNF-α拮抗剂为目标的初筛、复筛和深入筛选模型。并利用筛选模型对中药提取混合物库进行了筛选。通过初筛得到了32个阳性样品,复筛得到了10个阳性样品。对混合物样品进行分部,得到了12个活性分部。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 综述
• 一 药物研究与药物筛选技术
• 二 TNFα／TNFR及其抑制剂的研究概况
• 1.TNFα的研究进展
• 2.TNF 的病理学作用
• 3.抗TNFα的策略
• 4.抗TNFα治疗在一些领域中的应用
• 参考文献
• 第二章 TNF和sTNFR的基因克隆、表达、蛋白纯化及活性鉴定
• 一.TNF基因克隆、表达、蛋白纯化及活性鉴定
• 1.材料和方法
• 2.结果
• 3.小结
• 二.sTNFR 基因克隆、表达、蛋白纯化及活性鉴定
• 1.材料和方法
• 2.结果
• 3.小结
• 三.讨论
• 参考文献
• 第三章 筛选模型及初筛和复筛
• 一.实验原理
• 二.材料
• 三.实验方法
• 四.初筛模型的建立
• 1.TM2 浓度的选择
• 2.SFC 浓度的选择
• 3.各条件综合实验
• 4.标准样品的拮抗活性量效关系
• 5.中药筛选浓度的确定
• 6.方法验证
• 7.小结
• 五.初筛
• 六.复筛
• 1.方法
• 2.复筛结果判定
• 七.讨论
• 参考文献
• 第四章 深入筛选方法建立和筛选
• 一.WashELISA
• 1.1 WashELISA方法
• 1.2 方法验证
• 1.3 WashELISA结果
• 二.分部活性测定
• 1.1 分部方法
• 1.2 样品分部的活性
• 1.3 活性分部的量效关系
• 三.讨论
• 参考文献
• 第五章 总结和展望
• 论文发表情况
• 致谢