论文摘要
本研究通过同源重组构建了三株重组鸡痘病毒:vFVVP3HNIL18、vFVVP3 和vFVHN。运用Souther blot、Western blot、RT-PCR 和间接免疫荧光等方法检测外源基因重组情况及重组鸡痘病毒在肿瘤细胞内的表达。实验结果显示,外源基因已重组入鸡痘病毒基因组中,且可在鸡胚成纤维细胞中有效表达。采用吖锭橙/溴化乙锭染色、超薄切片、基因组DNA 电泳、DCFA 染色和罗丹明123 染色等方法观察了重组鸡痘病毒感染致HCT-8 肿瘤细胞的死亡方式及通路。实验结果显示,重组鸡痘病毒的感染最终导致肿瘤细胞凋亡,且重组鸡痘病毒所诱导的细胞凋亡主要是通过线粒体途径发生的。另外,重组鸡痘病毒还上调了肿瘤细胞表面MHC-I 分子的表达,并提高肿瘤细胞的免疫原性。本研究复制了C57BL/6 小鼠荷H22 肿瘤模型,探讨了重组鸡痘病毒体内抑瘤作用,实验结果显示,重组鸡痘病毒可有效抑制实体肿瘤的生长并刺激机体产生抗肿瘤免疫反应。本研究实验结果表明,尽管vFVVP3 和vFVHN 均有一定的抑瘤作用,但vFVVP3HNIL18 的抑瘤率显著高于vFVVP3 和vFVHN。研究提示,重组鸡痘病毒在动物体内外发挥了抗肿瘤作用,并且HN 基因、IL-18 基因和VP3 基因具有协同抑瘤效应。
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