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影响山羊卵母细胞和胚胎冷冻效果因素的研究

2020-11-22阅读(668)

影响山羊卵母细胞和胚胎冷冻效果因素的研究

论文摘要

本文研究了不同冷冻方法、冷冻保护液、冷冻前CB处理、卵母细胞的成熟阶段和成熟类型、不同基础液以及解冻时的水浴温度等因素对山羊卵母细胞冷冻-解冻后体外受精和激活效果的影响;同时,对不同冷冻方法、冷冻保护液、解冻时的水浴温度以及EFS40中的不同添加成分对山羊胚胎冷冻-解冻后体内、外发育效果等也进行了研究。研究表明,常规冷冻法、玻璃化细管法和OPS法都可用于山羊卵母细胞的冷冻保存,但OPS法的冷冻保存效果略好于常规冷冻法和玻璃化细管法。在常规冷冻法中,1.5mol/L EG与1.5mol/L PROH的冷冻保护效果基本一致,但前者的冷冻保护效果略好于后者（IVF后卵裂率25.81%（16/62）:23.91%（11/46）,桑囊发育率3.23%（2/62）:2.17%（1/46））;在玻璃化细管法中,EDFS40的冷冻保护效果略好于20%EG+20%DMSO（IVF后卵裂率25.30%（21/83）:24.56%（14/57）,桑囊发育率3.61%（3/83）:3.51%（2/57））,而在OPS法中则是后者略好于前者（IVF后卵裂率33.33%（19/57）:30.99%（22/71）,桑囊发育率5.26%（3/57）:4.23%（3/71））,但两种玻璃化液的冷冻保护效果间差异不显著。冷冻前将山羊卵母细胞在含有0.75mg/L CB的成熟培养液中37℃处理30min,可显著或极显著的提高冷冻-解冻后卵母细胞的形态正常率（常规冷冻法84.93%（62/73）:67.92%（36/53）,玻璃化细管法90.22%（83/92）:73.13%（49/67）,OPS法79.17%（57/72）:59.57%（28/47））,同时可使其发育效果得到一定程度的提高（常规冷冻法:IVF后卵裂率25.81%（16/62）:11.11%（4/36）,桑囊发育率3.23%（2/62）:0;玻璃化细管法:IVF后卵裂率25.30%（21/83）:12.24%（6/49）,桑囊发育率3.61%（3/83）:0;OPS法:IVF后卵裂率33.33%（19/57）:17.86%（5/28）,桑囊发育率5.26%（3/57）:0）。与成熟卵母细胞相比,GV期卵母细胞对低温更敏感,使用现有的冷冻方法和冷冻保护液冷冻保存GV期山羊卵母细胞尚无法得到满意的结果。采用玻璃化细管法冷冻保存的山羊卵母细胞,37℃与25℃水浴解冻后的形态正常率间差异不显著,37℃水浴解冻后的形态正常率显著的高于32℃水浴解冻者,但三者在发育效果上无统计学差异。采用三步法和一步法对常规冷冻的山羊卵母细胞进行解冻,解冻后卵母细胞的发育效果间无显著差异（激活后卵裂率28.95%（11/38）:30.23%（13/43）,桑囊发育率5.26%（2/38）:4.65%（2/43））,说明可以用一步法代替三步法进行解冻,从而简化解冻程序。将常规冷冻的体内外成熟的山羊卵母细胞解冻后的激活效果进行比较,二者的发育效果间不存在显著差异。在山羊胚胎冷冻保存方面,以1.5mol/L EG、1.5mol/L PROH和1.5mol/L甘油为冷冻保护液对山羊胚胎进行常规冷冻保存,三者对山羊胚胎的冷冻保护效果无显著差异,其中以1.5mol/L EG的冷冻保护效果为佳。以EFS40为玻璃化液对山羊胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻,其结果与常规冷冻间差异不显著,表明三种方法均可用于山羊胚胎的冷冻保存。采用25℃和37℃水浴对常规冷冻和玻璃化冷冻后的山羊胚胎进行解冻,从解冻后的发育效果看,二者间无显著差异,但37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃。还比较了玻璃化液EFS40中添加FCS和BSA后与既不添加FCS也

论文目录

  • 1 引言
  • 2 材料和方法
  • 2.1 试验动物及卵巢来源
  • 2.2 试剂及其配制
  • 2.3 OPS管的制备
  • 2.4 仪器设备
  • 2.5 卵母细胞及胚胎来源
  • 2.5.1 卵母细胞的来源
  • 2.5.2 胚胎的采集
  • 2.6 卵母细胞的冷冻保存
  • 2.6.1 冻前处理
  • 2.6.2 常规冷冻及解冻
  • 2.6.3 玻璃化细管法冷冻及解冻
  • 2.6.4 OPS法冷冻及解冻
  • 2.6.5 卵母细胞冷冻效果的评定
  • 2.7 胚胎的冷冻保存
  • 2.7.1 常规冷冻及解冻
  • 2.7.2 玻璃化细管法冷冻及解冻
  • 2.7.3 OPS法冷冻及解冻
  • 2.7.4 胚胎冷冻效果的评定
  • 2.8 试验设计
  • 2.9 统计方法
  • 3 结果
  • 3.1 山羊卵母细胞冷冻保存后的发育效果
  • 3.1.1 不同冷冻方法、冷冻保护液冷冻后的山羊卵母细胞体外受精和激活效果
  • 3.1.2 冷冻前CB处理对山羊卵母细胞冷冻-解冻后体外受精及激活效果的影响
  • 3.1.3 不同成熟阶段的山羊卵母细胞玻璃化冷冻后的体外受精及激活效果
  • 3.1.4 不同基础液对山羊卵母细胞玻璃化冷冻后体外受精和激活效果的影响
  • 3.1.5 解冻时不同水浴温度对山羊卵母细胞玻璃化细管法冷冻后体外受精效果的影响
  • 3.1.6 不同解冻程序对山羊卵母细胞常规冷冻后激活效果的影响
  • 3.1.7 不同成熟类型的山羊卵母细胞常规冷冻后的激活效果
  • 3.2 山羊胚胎冷冻保存后的发育效果
  • 3.2.1 不同冷冻方法、冷冻保护液对山羊胚胎冷冻-解冻后发育效果的影响
  • 3.2.2 解冻时不同水浴温度对山羊胚胎冷冻-解冻后发育效果的影响
  • 3.2.3 玻璃化液中不同添加成分对山羊胚胎玻璃化细管法冷冻后发育效果的影响
  • 3.2.4 山羊冷冻胚胎移植妊娠效果
  • 4 讨论
  • 4.1 影响山羊卵母细胞冷冻保存及其发育效果的因素
  • 4.1.1 冷冻保存方法对山羊卵母细胞发育效果的影响
  • 4.1.2 冷冻保护液对山羊卵母细胞发育效果的影响
  • 4.1.3 冷冻前CB处理对山羊卵母细胞发育效果的影响
  • 4.1.4 成熟阶段对山羊卵母细胞玻璃化冷冻后发育效果的影响
  • 4.1.5 基础液对山羊卵母细胞玻璃化冷冻后发育效果的影响
  • 4.1.6 解冻时水浴温度对山羊卵母细胞玻璃化冷冻后发育效果的影响
  • 4.1.7 解冻程序对山羊卵母细胞常规冷冻后发育效果的影响
  • 4.2 影响山羊胚胎冷冻保存及其发育效果的因素
  • 4.2.1 冷冻方法对山羊胚胎发育效果的影响
  • 4.2.2 冷冻保护液对山羊胚胎常规冷冻后发育效果的影响
  • 4.2.3 解冻时水浴温度对山羊胚胎发育效果的影响
  • 4.2.4 冷冻液中添加成分对山羊胚胎冷冻保护效果的影响
  • 4.2.5 影响山羊冷冻胚胎移植奸娠效果的因素
  • 5 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 在读期间发表的学术论文
  • 作者简历
  • 致谢
  • 家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

    • 相关论文文献

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