酪丝缬肽（YSV）对肺癌的治疗作用及影响组蛋白乙酰化对细胞周期调控的机制研究

论文摘要

目的：研究三肽化合物酪丝缬肽（Tyroservatide,YSV）在体内外的抗肺癌作用,初步探讨其影响人肺癌细胞组蛋白乙酰化修饰,阻抑细胞周期进程,促进肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法：1.应用MTS法和中空纤维测定法观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞体外和体内生长的影响。2.应用Annexin V/PI双染法、DNA Ladder检测方法观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的凋亡诱导作用；并以流式细胞术观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期的影响。3.应用实时荧光定量PCR和Western Blot方法观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27的mRNA和蛋白表达的影响。4.应用Western Blot方法,观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞组蛋白乙酰化H3、H4水平的影响；应用荧光检测技术和分光光度法分别观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的组蛋白去乙酰化酶（HDAC）和组蛋白乙酰化酶（HAT）活性的影响。5.应用染色质免疫沉淀（ChIP）方法,观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27启动子相关组蛋白乙酰化程度的影响。结果：1.YSV在体外（0.2～3.2mg/ml）和体内（160～320μg/kg/d）均能够明显抑制人肺癌NCI-H292细胞的增殖（P<0.05）。2. YSV （0.8,1.6mg/ml）能够诱导人肺癌NCI-H292细胞凋亡,使凋亡细胞数明显增多,形成明显的DNA Ladder;能够阻抑人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期进程,使S期细胞百分比明显增高,G2/M期百分比明显降低（P<0.05）。3.YSV能够上调人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27的表达。4.YSV能够上调人肺癌NCI-H292细胞组蛋白H3和H4的乙酰化水平；抑制组蛋白去乙酰化酶的活性,对组蛋白乙酰化酶的活性未见明显影响。5.YSV能够诱导人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27基因启动子区域组蛋白乙酰化水平增加,激活p21、p27基因的转录,诱导细胞周期阻滞。结论：YSV能够明显抑制人肺癌NCI-H292细胞的体内外增殖,阻抑肿瘤细胞的细胞周期,诱导凋亡。其作用机制是通过抑制人肺癌NCI-H292细胞组蛋白去乙酰化酶的活性,增加细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27基因启动子区域组蛋白H3、H4的乙酰化水平,促进p21、p27基因转录的活化和表达,进而影响细胞周期进程,使细胞阻滞于S期,抑制细胞增殖,诱导细胞调亡。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 第一部分 YSV对人肺癌NCI-H292细胞体内外增殖影响的实验研究
• 实验一 YSV对人肺癌NCI-H292细胞体外增殖的影响
• 实验二 中空纤维测定法观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞体内增殖的影响
• 第二部分 YSV对人肺癌NCI-H292细胞凋亡和细胞周期影响的实验研究
• 实验一 YSV对人肺癌NCI-H292细胞的细胞凋亡的影响
• 实验二 YSV对人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期的影响
• 第三部分 YSV对人肺癌NCI-H292细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21和p27表达影响的实验研究
• 实验一 YSV对人肺癌NCI-H292细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21和p27 mRNA水平的影响
• 实验二 YSV对人肺癌NCI-H292细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21和p27蛋白表达的影响
• 第四部分 YSV对人肺癌NCI-H292细胞组蛋白乙酰化水平影响的实验研究
• 实验一 YSV对人肺癌NCI-H292细胞乙酰化组蛋白H3、H4表达的影响
• 实验二 YSV对人肺癌NCI-H292细胞组蛋白去乙酰化酶（HDAC）和组蛋白乙酰化酶（HAT）活性的影响
• 第五部分 YSV对人肺癌NCI-H292细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21和p27启动子相关组蛋白的乙酰化影响的实验研究
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 组蛋白乙酰化、去乙酰化与恶性肿瘤
• 综述参考文献
• 致谢