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检测SMD残留的免疫传感器的研制

2020-12-04阅读(387)

检测SMD残留的免疫传感器的研制

论文摘要

磺胺类药物是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药,主要用于细菌感染性疾病和某些原虫病的预防和治疗。但使用不合理很容易造成组织中的残留和蓄积。许多国家和组织规定了其最高残留限量（MRLs）为0.1μg/g ,甚至不得检出。高效液相色谱、气-质联用等是磺胺类药物残留检测的法定方法,但成本较高,方法繁琐,不适于大量样本的测定。本课题旨在研制用于检测磺胺类药物SMD的免疫传感器,主要工作包括:葡萄糖氧化酶标记SMD的反应、标记前后葡萄糖氧化酶（GOD）活力的检测、GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体的特异结合与检测、GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体特异结合后的活性测定、单克隆抗体在尼龙膜上的固定、信号传感器的装配等。葡萄糖氧化酶标记SMD反应:本研究采用EDC为催化剂,合成GOD-SMD,通过质谱检测,标记后的葡萄糖氧化酶的分子量明显增加,可以确定SMD与GOD偶联成功;通过分子量计算可知,平均每个葡萄糖氧化酶上连接6个SMD。并且通过傅立叶变换红外吸收光谱、紫外吸收光谱和圆二色光谱检测,发现GOD-SMD与GOD在空间结构上有所差异。标记后葡萄糖氧化酶（GOD-SMD）活力的测定:用改良Amano法测定了偶联在SMD上的GOD活性,发现其活性很高。GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体的特异结合与检测,由于合成单克隆抗体时所用的的抗原载体蛋白质是牛血清白蛋白,只有半抗原与GOD-SMD相同。有报道认为,载体蛋白的不同会影响到抗原抗体的特异性结合。本实验通过CD,UV光谱扫描方法证实了GOD-SMD与抗BSA-SMD单克隆抗体的特异性结合,即两者发生了免疫反应。GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体能够发生反应。GOD-SMD与抗BSA-SMD的单克隆抗体特异结合后的活性测定:用改良的Amano法测定了与抗BSA-SMD单克隆抗体特异结合后的GOD-SMD活性,实验证明其活性良好。信号转换器的装配:验证了能够使用离子分析仪（电极）把GOD-SMD和GOD的酶催化的化学信号转变为容易定量化测定的电信号。用离子分析仪（电极）实际测定了GOD-SMD和GOD的酶活力,都取得了成功并且绘制了曲线图。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 符号说明
  • 第一章 文献综述
  • 1 磺胺类药物残留检测现况简介
  • 2 标记免疫传感器的基本原理
  • 3 GOD 的结构、功能和酶标记反应的关系
  • 4 蛋白质折叠理论对于酶标反应和蛋白质固定化的指导价值
  • 5 质谱技术
  • 6 光谱检测原理
  • 7 以碳二亚胺为催化剂的酶标记反应的原理
  • 8 抗原-抗体的特异结合与检测的实验原理
  • 9 分子识别的基本原理
  • 10 葡糖氧化酶活力测定的实验原理
  • 11 抗体固定化于尼龙膜的实验原理
  • 12 信号转换器的装配
  • 13 研究目的及意义
  • 第二章 葡萄糖氧化酶标记 SMD
  • 1 材料与方法
  • 2 检测结果
  • 3 分析与讨论
  • 4 结论
  • 第三章 GOD-SMD 二级结构红外光谱鉴定
  • 1 材料与方法
  • 2 实验结果
  • 3 分析与讨论
  • 4 结论
  • 第四章 光谱检测抗 BSA-SMD 单抗与GOD-SMD 的免疫反应
  • 1 圆二色光谱扫描检测
  • 1.1 材料与方法
  • 1.2 实验结果
  • 1.3 分析与讨论
  • 1.4 结论
  • 2 紫外光光谱和可见光光谱扫描检测免疫反应
  • 2.1 材料与方法
  • 2.2 结果
  • 2.3 分析与讨论
  • 2.4 结论
  • 第五章 GOD-SMD 的酶活力测定
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 第六章 单抗（ANTI-BSA-SMD）和 GOD-SMD 反应后 GOD 酶活性检测
  • 1 材料与方法
  • 2 实验结果
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 第七章 单克隆抗体在聚酰胺膜上的固定
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 实验结果
  • 4 讨论
  • 第八章 信号转换器的装配
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 检测结果
  • 4 讨论
  • 5 结论
  • 第九章 全文结论
  • 参考文献
  • 致谢

    • 相关论文文献

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