脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞及其与骨髓间充质干细胞的比较

论文摘要

间充质干细胞具有自我更新和多分化能力,在一定的培养条件下可分化为多种不同的细胞,是组织工程的理想细胞。此论文将脐带来源的间充质干细胞（UC-MSCs）诱导分化为胰岛样细胞,并将其与骨髓来源的间充质干细胞（BM-MSCs）进行比较。与BM-MSCs相比,UC-MSCs具有明显更强的增殖能力。经过诱导培养后,UC-MSCs所形成的胰岛样细胞团块比BM-MSCs大,表明UC-MSCs可更有效地被诱导为胰岛样细胞。采用细胞免疫荧光法分析发现,胰岛细胞特异性转录因子PDX-1在分化的UC-MSCs内的表达水平明显高于分化的BM-MSCs。流式细胞分析结果表明另一个胰岛细胞特异性标志物C-peptide的表达细胞比例在分化的UC-MSCs内也高于分化的BM-MSCs,分别为53.3%和30.9%。放射免疫测定法发现,在诱导分化了3天后,分化的UC-MSCs分泌胰岛素的水平也高于分化的BM-MSCs,分别为33.7 mIU/L和25.5 mIU/L。另外,与BM-MSCs相比,UC-MSCs更容易获得,并且由于UC-MSCs来源于免疫系统尚未发育完善的新生儿脐带,不表达某些免疫膜蛋白,所以UC-MSCs作为组织工程种子细胞在移植后不容易被排斥掉,这对组织工程有非常重要的意义。综上所述,与BM-MSCs相比,UC-MSCs有更强的增殖能力以及更强的胰岛细胞分化能力,并且具有更容易获得和不易引起免疫排斥的优势,所以UC-MSCs更适合于胰岛细胞的组织工程,此研究结果为治疗I型糖尿病有用的理论依据和较好的细胞来源。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1.1 糖尿病的现状及其治疗方法概述
• 1.2 人干细胞的来源
• 1.2.1 骨髓来源的MSCs
• 1.2.2 脂肪来源的间充质干细胞
• 1.2.3 胎盘/脐带来源的MSCs
• 1.2.4 其他来源的MSCs
• 1.3 胰岛素分泌细胞分化概况
• 1.3.1 参与调控分化的物质
• 1.3.2 干细胞及其诱导分化
• 1.4 实验目的和意义
• 第二章 实验材料与实验方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 标本材料来源
• 2.1.2 细胞培养试剂
• 2.1.3 细胞检测及分子生物学试剂
• 2.1.4 主要实验仪器与设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 培养液以及消化液的配置
• 2.2.2 人UC-MSCs 的体外分离培养
• 2.2.3 人BM-MSCs 的体外分离培养
• 2.2.4 流式细胞术鉴定细胞表面抗原及胞内蛋白表达
• 2.2.5 体外诱导间充质干细胞向成骨细胞分化
• 2.2.6 体外诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化
• 2.2.7 von-Kossa 染色
• 2.2.8 ALP（碱性磷酸酶）染色
• 2.2.9 细胞免疫荧光检测
• 2.2.10 放射免疫法（RIA）检测胰岛素分泌
• 2.2.11 统计学分析数据
• 第三章 实验结果
• 3.1 UC-MSCs 和BM-MSCs 的体外培养生长状况
• 3.2 UC-MSCs 和BM-MSCs 的表型特征
• 3.2.1 FACS 抗原表型分析
• 3.2.2 成骨细胞分化潜能
• 3.3 UC-MSCs 和 BM-MSCs 诱导成胰岛样细胞的形态变化
• 3.4 UC-MSCs 和 BM-MSCs 被诱导分化后胰岛标志性蛋白的表达情况
• 3.5 胰岛素分泌量的测定
• 第四章 讨论与小结
• 4.1 讨论
• 4.2 小结
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历、在学期间发表的学术论文