日本血吸虫Sj23基因转化紫花苜蓿的初步研究

论文摘要

血吸虫病是一种世界性的寄生虫传染性疾病,对人类及家畜的健康安全具有极大的威胁,血吸虫疫苗的研制具有重大的经济价值及社会意义。转基因植物疫苗是近年来发展起来的一种新技术,因其具有廉价、安全、有效等优点,已成为当今疫苗研究领域的热点。紫花苜蓿是全世界应用最广泛的一种豆科牧草,具有较高的营养价值和成熟的遗传操作经验。为了开发血吸虫转基因植物疫苗,本研究将Sj23转化紫花苜蓿,并进行DNA及表达水平的检测,取得的主要成果如下:1.扩增日本血吸虫Sj23基因,经TA克隆和测序验证后,插入pCAMBIA1303的多克隆位点,构建真核表达载体pCAMBIA1303-Sj23。2.以紫花苜蓿为材料,通过根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）LBA4404介导,将Sj23对紫花苜蓿进行遗传转化。采用2 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT的激素组合在MS培养基上诱导愈伤组织,获得96%的出愈率。再使用50 mg/L的Hyg进行延迟筛选后,获得120个抗性愈伤组织。3.提取抗性愈伤组织DNA,使用Sj23引物进行PCR检测获得68个阳性愈伤组织。随机选择10个阳性愈伤组织提取蛋白质进行SDS-PAGE分析,发现在2个愈伤中表达了一条约为23kDa的蛋白质带,经Western blot检测该蛋白对血吸虫感染的小鼠血清具有免疫原性,表明Sj23可能已经整合到苜蓿愈伤组织基因组中并表达。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 血吸虫及血吸虫疫苗的研究现状
• 1.2 转基因植物疫苗的研究现状
• 1.3 紫花苜蓿基因工程研究
• 1.4 研究意义与内容
• 2 日本血吸虫基因Sj23 的克隆及载体构建
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 3 根癌农杆菌介导的Sj23 基因转化紫花苜蓿
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 4 转基因愈伤组织的检测及诱导再生植株
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.3 实验结果
• 4.4 讨论
• 5 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录1 攻读硕士学位期间发表的专利与论文
• 附录2 日本血吸虫抗原基因Sj23 的测序结果
• 附录3 载体图谱
• 附录4 图版
• 附录5 主要英文缩略词表