来氟米特对糖尿病大鼠早期肾脏损害的保护作用研究

论文摘要

[目的]通过对链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）大鼠模型,给予来氟米特（Leflunomide,LEF）干预治疗,观察LEF对DM大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）及其上游核因子-κB（NF-κB）表达和炎症细胞浸润的影响,探讨其对糖尿病大鼠早期肾脏损害的保护作用及机制,为临床使用LEF防治DN提供实验及理论依据。[方法]选择健康同龄雄性SD大鼠44只,体重200±20g,随机取32只按65mg·kg-1·d-1腹腔一次性注射STZ溶液造模（待72小时后测尾尖血糖≥16.7mmol/L,认为DM大鼠造模成功,血糖不达标的5只大鼠剔除实验）,将DM大鼠随机分为糖尿病组（DM组,14只）和LEF治疗组（DM+LEF组,13只）。其余12只大鼠作为正常对照组（NC组）。DM+LEF组给予LEF10mg·kg-1·d-1（以1%羧甲基纤维素钠溶液（CMC）为悬浮剂悬浮）灌胃,其余两组给予等量CMC灌胃。实验期间,所有大鼠自由进食和饮水,均不给胰岛素及其它降糖药物治疗,观察一般情况。分别于DM成模后4周、8周各组随机处死6只,检测大鼠体重（BW）、肾重（KW）、血糖（BG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、尿肌酐（Ucr）、尿微量白蛋白（MAU）,并计算肾脏肥大指数（肾重KW/体重BW）、肌酐清除率（Ccr）、24小时尿微量白蛋白排泄率（UAER）。光镜和电镜观察肾脏病理组织学改变;免疫组化检测肾脏ED-1标记的单核巨噬细胞的浸润情况,免疫组化检测MCP-1、NF-κB在肾脏的表达;实时荧光定量RT-PCR的方法检测肾组织中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的mRNA的表达;并与肾损害程度作相关性分析。[结果]结果一般指标:DM组、DM+LEF组大鼠出现消瘦,多饮、多食、多尿,两组并无差异,而NC组则无上述情况出现;DM组大鼠随着病程的延长,BG、KW/BW、BUN、Ccr和UAER均上升,体重下降明显,与NC组比较有显著差异（P<0.05）。而DM+LEF组,其8周时BUN明显低于DM组（P<0.01）,BW高于DM组,而KW/BW、Ccr、UAER则于各时段均低于DM组（P<0.01或P<0.05）。病理组织学观察:DM组肾小球系膜区相对面积和肾小球基底膜厚度较NC组显著增加（P<0.01）, DM+LEF组肾小球系膜区相对面积和肾小球基底膜厚度与DM组比较显著减小（P<0.01）;DM组肾组织内ED-1、NF-κB和MCP-1的蛋白质表达及MCP-1的mRNA表达均较NC组显著上调（P<0.01）,而DM+LEF组上述指标与DM组比较被显著抑制（P<0.01或P<0.05）。肾脏的巨噬细胞浸润数与肾损害程度（用UAER表示）成正相关（r=0.889,P<0.01）。[结论]结果进一步证实了STZ诱导建立的DM大鼠存在早期肾脏炎症损害,经LEF治疗后可降低DM大鼠的炎症细胞浸润、改善肾脏高滤过状态、减少尿蛋白排泄。应用LEF治疗后,可下调肾组织NF-κB、MCP-1、ED-1的表达,并下调MCP-1mRNA的表达,减轻基底膜厚度及足细胞足突融合,减少细胞外基质沉积及肾组织增生程度。LEF对糖尿病大鼠早期肾脏损害有保护作用,其机制可能与其抑制NF-κB表达,从而抑制NF-κB下游调控的炎症因子（MCP-1）的表达,减少肾组织单核巨噬细胞的聚集有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附：综述