HPLC-MS/MS法测定鳗鱼及其制品中三类药物残留

论文摘要

随着畜牧业的发展,抗生素在畜牧业生产中的运用不断增加,包括喹喔啉类、喹诺酮类、磺胺类等在内的兽药在畜牧业广泛运用。然而,由于抗生素的不合理使用而带来的抗生素残留也成为我国和世界各国所关注的问题。福建省是全国鳗鱼养殖与加工大省,高密度的集约型水产养殖使得鱼类疾病增加,鳗鱼中的抗生素残留成为一个受重视的焦点问题。喹诺酮类药物、磺胺类药物、喹喔啉类药物是最经常用于鳗鱼的三类药物,本文采用液相色谱-串联质谱仪对鳗鱼组织三类药物的残留检测方法进行了研究,主要做了以下工作:1建立了鳗鱼及其制品中3种喹喔啉类化合物残留量的液相色谱-电喷雾串联质谱测定方法。样品用酸性乙腈-甲醇混合溶剂提取试样中的残留物,提取液浓缩后经HLB固相萃取小柱净化后,液相色谱-串联质谱法测定,以30%乙腈:70%水（含0.1%甲酸）为流动相进行反相液相色谱分离,电喷雾正离子源进行离子化,选择反应监测方式（SRM）对这四种物质各自的母离子（M/Z270.2、263、175）及其三对子离子（M/Z 189和143、231和131、147和131）进行监测,三级四极质谱测定;用全扫描方式对每种物质进行了结构解析。本方法研究的3种喹喔啉类化合物（喹赛多、卡巴氧、喹喔啉-2-羧酸、）的线性范围为0.03-100μg/L,线性相关系数r＞0.998;在2-10μg/kg的3个添加水平的平均回收率为69.10%-93.54%;相对标准偏差为2.49%-9.03%;方法检出限（LOD）为2-3μg/kg。2建立了鳗鱼及其制品中喹诺酮类和磺胺类药物残留量的液相色谱-电喷雾串联质谱测定方法。采用二氯甲烷/乙腈（5+95,v/v）混合溶剂提取样品中的残留物,提取液浓缩后经HLB固相萃取小柱净化,以液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。本方法对喹诺酮类和磺胺类药物的线性范围为2-100μg/L,相关系数r＞0.990;在2-20μg/L的4个添加水平的回收率为62.36%-101.67%;相对标准偏差为2.37%-10.62%;方法检出限（LOD）为2μg/kg。3实验结果表明本文建立的液相色谱-串联质谱分析方法具有特异性强,样品前处理简单等特点,可快速准确地测定成分复杂的鳗鱼极其制品中喹喔啉类药物、喹诺酮类药物和磺胺类药物的残留量。实验结果可为上述三类药物在养殖业中的应用提供参考,为药物的有效性及安全性提供数据,为临床合理用药和制定休药期提供依据。这对于监控鳗鱼极其制品中药物多残留,保障鳗鱼极其制品中安全和维护人们的健康,具有重要的理论和实践意义。此外,鳗鱼极其制品中三类药物的残留检测方法的建立,对于进一步解决我国出口鳗鱼极其制品检测技术标准滞后、实现产品出口跨越国外技术性贸易壁垒也有着积极的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 引言
• 1.1 药物残留危害的分析
• 1.2 国内外对兽药残留问题的监督管理现状
• 2 兽药残留检测方法概况
• 3 喹喔啉类药物的应用及残留分析现状
• 3.1 概述
• 3.2 喹喔啉类药物的残留分析
• 4 喹诺酮类药物的应用及残留分析现状
• 4.1 概述
• 4.2 喹诺酮类药物的残留危害
• 4.2.1 过敏反应
• 4.2.2 毒性作用
• 4.2.3 对细菌耐药性的影响
• 4.3 喹诺酮类药物的残留检测方法
• 4.3.1 微生物检测法
• 4.3.2 免疫分析测定法（immunoassay,IA）
• 4.3.3 免疫亲和色谱法（immunoafinity chromatography,IAC）
• 4.3.4 液相色谱法（liquid chromatography LC）
• 4.3.5 高效毛细管电泳法（High performance capillary electrophoresis HPCE）
• 4.3.6 高效液相色谱分析法（high performance liquid chromatography HPLC）
• 4.3.7 液相色谱-质谱联用法（liquid chromatography-mass spectrometry LC-MS）
• 5 磺胺类药物的应用及残留分析现状
• 5.1 概述
• 5.2 磺胺类药物的残留危害
• 5.3 磺胺类药物的残留检测方法
• 5.3.1 传统的微生物抑菌实验
• 5.3.2 酶联免疫测定（ELISA）
• 5.3.3 放射免疫测定法（RIA）
• 5.3.4 高效液相色谱法（HPLC）
• 5.3.4 气相色谱法（GC）
• 5.3.5 薄层色谱法（TLC）
• 5.3.6 高效毛细管电泳法（HPCE）
• 5.3.7 色谱质谱联用技术
• 6 本论文的选题背景、目的、内容及意义
• 6.1 选题背景
• 6.2 本论文的研究目的
• 6.3 本论文主要研究内容
• 6.4 本论文研究的意义
• 第二章 鳗鱼及其制品中喹赛多、卡巴氧、喹喔啉-2-羧酸的残留检测
• 1 前言
• 2 实验部分
• 2.1.仪器和设备
• 2.2 试样制备和保存
• 2.3 试剂及标准溶液
• 2.4 液相色谱条件
• 2.5 质谱条件
• 2.6 样品处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 样品前处理方法的优化
• 3.2 质谱条件的优化
• 3.2.1 母离子选择
• 3.2.2 子离子选择
• 3.3 方法学论证与结果分析
• 3.3.1 线性范围、回归方程及检出限
• 3.3.2 药物的色谱行为
• 3.3.3 方法的回收率和精密度
• 3.3.4 样品的测定
• 4 结论
• 第三章 高效液相串联质谱法测定鳗鱼及其制品中喹诺酮类药物和磺胺类药物的残留量
• 1 前言
• 2 实验部分
• 2.1 实验仪器和设备
• 2.2 试剂和标准溶液的配制
• 2.2.1 试剂
• 2.2.2 试剂的配制
• 2.2.3 标准品
• 2.2.4 药物标准储备液的配制
• 2.2.5 标准工作液
• 2.3 实验材料制备和保存
• 2.4 仪器条件
• 2.4.1 液相色谱条件
• 2.4.2 质谱条件
• 2.5 样品前处理
• 3 结果与讨论
• 3.1 流动相的选择
• 3.2 质谱条件的优化
• 3.3 样品前处理方法的优化
• 3.4 方法学验证
• 3.4.1 标准曲线的制作
• 3.4.2 检出限和定量限
• 3.4.3 方法的回收率和精密度
• 3.5 实际样品的测试
• 4 结论
• 总结与展望
• 1 实验总结
• 2 展望
• 参考文献
• 附录一
• 附录二
• 致谢