人脑胶质瘤干细胞初步研究

论文摘要

目的:从人脑胶质瘤体外细胞系和胶质瘤组织中分离鉴定肿瘤干细胞,为进一步研究其生物学特性奠基。 方法:1、将SHG44细胞系和SHG44-9细胞株,分别应用含血清培养基（DMEM+10%FCS）和无血清培养基（DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF）培养。用CD133免疫磁珠分离干细胞、流式细胞仪检测Hoechst33342和Nestin阳性细胞、免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞中的Nestin、NSE、GFAP阳性细胞。2、采集8例人脑胶质瘤手术标本,原代培养形成肿瘤球,经免疫磁珠分离获取CD133+细胞,用有限稀释法在含细胞因子组合的无血清培养基中得到肿瘤细胞球后传代。取第5代肿瘤干细胞,用含10%FBS培养液诱导分化。分化前后用Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞的相应标志物。 结果:1、CD133磁珠分离得到的干细胞的比例:在血清组SHG44和SHG44-9分别为0.021%和0.035%;无血清组分别为1.2%和2.3%。而Hoechst33342和CD133标记后流式细胞仪检测干细胞比例:血清组中SHG44、SHG44-9分别为1.5%、0.37%;无血清组分别为16.4%和29.1%。并且这些细胞能够增殖和分化成神经元和胶质细胞。而Nestin标记后SHG44、SHG44-9中分别有51.05%、77.53%阳性细胞。2、在1例间变性室管膜瘤标本中克隆到了CD133+细胞,这些细胞在体外培养时能长期维持呈球形生长（3个月,14代）,在适合的环境中随时能自我更新和增殖、分化成NSE+,GFAP+的瘤性神经元和瘤性胶质细胞,而CD133-细胞则无此特性。 结论:体外长期传代培养的人脑胶质瘤细胞系中存在肿瘤干细胞SHG44s,CD133磁珠和Hoechst33342流式细胞仪分离和检测胶质瘤干细胞是行之有效的方法,而Nestin+细胞是干细胞分化后的祖细胞或前体细胞,不能作为分离和检测干细胞特异性标记

论文目录

• 苏州大学硕士学位论文详细摘要
• 引言
• 第一部分 人脑胶质瘤干细胞 SHG-44s的克隆及初步鉴定
• 第二部分 从人脑胶质瘤组织中克隆肿瘤干细胞和长期培养的初步研究培养
• 结论
• 综述
• 发表论文
• 附录
• 致谢