伪狂犬病、猪瘟、口蹄疫三联DNA疫苗的研究

论文摘要

伪狂犬病、猪瘟、口蹄疫是严重危害养殖业和影响畜产品进出口贸易的三个主要A类烈性传染病。其中,伪狂犬病与口蹄疫同为人畜共患传染病,还严重威胁着人类的健康和生命。由于传统的灭活苗、减毒苗等疫苗形式存在安全性、免疫效果不确切、储运条件要求高等诸多问题,其应用已受到广泛的限制。核酸疫苗是90年代兴起的新型疫苗,已在多种疾病的防治中显示出巨大的潜能,预防以上三种疾病的DNA疫苗研究已经分别取得了初步的成果。本研究在现有研究基础上,探讨构建伪狂犬病、猪瘟、口蹄疫三联DNA疫苗的策略,结果如下: 1.用基因重组技术将伪狂犬病毒苏株gC’基因片段（含gC基因肝素结合域序列）、猪瘟病毒石门株E2基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,构建成真核表达质粒pVGC和pVE2。在此基础上,联合应用口蹄疫病毒2A序列和脑心肌炎病毒IRES序列连接构建了含有gC、E2和VP1三种基因的重组质粒pVGEV,并用电穿孔转染真核细胞,检测结果表明能够共表达三种目的基因。 2.将真核表达质粒pVGC、pVE2和PF-TPA,以不同的组方免疫12组BalB/C小鼠,免疫3次后,以间接ELISA检测免疫小鼠血清的抗体应答水平,淋巴细胞细胞因子诱生试验检测免疫小鼠的细胞免疫应答水平。结果初步表明:当3种质粒单独接种时诱导较高病毒特异性抗体和INF-γ水平;当3种疫苗混合注射时,PF-TPA诱导的病毒特异性抗体和INF-γ水平明显下降（p<0.05）,而pVGC、pVE2诱导无显著差异;当PF-TPA与pVGC、pVE2在不同位点注射时诱导的FMDV特异性抗体和INF-γ水平仍低于单独注射组亦降低（p=0.13）:当用VP1重组蛋白加强免疫时,能够克服混合组中对PF-TPA诱导抗体产生的抑制,但同单独注射相比INF-γ水平未见明显升高。 3.用三联疫苗重组质粒pVCEV接种BALB/C小鼠后能够诱导产生PRV、CSFV和CSFV特异性抗体。电击方法不能有效提高抗体的免疫应答水平。应用BCG-DNA（Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin,BCG）佐剂后体液免疫水平未见显著提高,而细胞免疫水平显著提高。

论文目录

• 英文缩写词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 真核质粒的构建和pVGEV在COS7细胞中的瞬时表达
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.小结
• 参考文献
• 第二部分 DNA疫苗的动物免疫试验
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.小结
• 参考文献
• 附录
• 结论
• 文献综述
• 发表论文
• 致谢