木薯醇腈酶cDNA的克隆及其表达的研究

论文摘要

手性化合物中不同立体异构体具有不同的生理活性,许多医用药品要求必须是单一性化合物。醇腈酶（α-Hydroxynitrilelyase, E. C. 4.1.2.10, HNL）作为一种生物催化剂能可逆地催化由HCN和醛（或酮）类化合物反应,生成手性氰醇,产物可转化成羟基化合物、胺化合物、羧基化合物等多种重要的手性中间体,进而转化成多种手性药物,从而克服了为得到纯手性化合物而采用光学拆分所带来的生产工序复杂、成本高等一系列问题。因此,在不对称合成领域中,HNL日益成为研究的热点。 目前已有许多HNL的相关报道,例如HNL酶活分析方法、基因组成与结构、克隆与表达等。国外已从多种植物中克隆了hnl基因,其中Hasslacher等人,将来自三叶胶（Heveabrasiliensis）的HNL cDNA分别在大肠杆菌Escherichia coli、酿酒酵母S. cerevisiae和甲醇酵母Pichia pastoris中实现了表达,而Haughes等人在E. coli中表达了来自木薯（Cassava）的hnl基因。国内仅有程树华等在E. coli中表达了木薯（Cassava）hnl基因,但尚无木薯（Cassava）hnl在真核表达系统中的报道。 本实验运用RT-PCR技术,从木薯（Cassava）幼叶组织中扩增出HNL全长cDNA序列,将其克隆至质粒pBluescript SK（pBS）中进行序列分析。结果表明:克隆的木薯（Cassava）HNL cDNA片段和文献报道的4个木薯（Cassava）HNL cDNA相比,核苷酸同源性最高为99.1%,氨基酸同源性最高为98.8%。利用PCR扩增和DNA重组技术将木薯（Cassava）HNL cDNA克隆到酵母表达质粒pPIC3.5K上,通过原生质体转化、高拷贝整合转化子筛选、诱导发酵、SDS-PAGE分析和

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1 手性药物研究进展
• 2 醇腈酶研究进展
• 3 结束语
• 参考文献
• 第二章 木薯醇腈酶cDNA的克隆及序列测定
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 参考文献
• 第三章 木薯醇腈酶cDNA基因在甲醇酵母中表达
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 第四章 木薯醇腈酶cDNA基因的原核表达
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 结论与展望
• 附录
• 致谢