论文摘要
乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）感染是世界范围的严重公共卫生问题之一,但是目前没有特效防治方法,存在的关键问题在于HBV基因组较小,易发生突变,限制了靶向抗病毒药物的发展。最近的研究表明,抑制宿主细胞中某些蛋白的功能可以阻断病毒感染。与病毒基因组相比,人类基因组序列中可能包括更多与病毒复制有关的基因。应用DNA微阵列（芯片）技术系统分析宿主基因表达,是一种从宿主细胞中发现潜在抗病毒靶标的有效方法。本室通过应用基因芯片技术,获得了HBV感染相关的3个关键分子,即表皮调节素（Epiregulin,简称EREG）、纤联蛋白（Fibronectin,简称FN）和去唾液酸糖蛋白受体（Asialoglycoprotein recertor,简称ASGPR）。本实验旨在前期工作的基础上,研究上述3个关键分子与乙型肝炎病毒表面抗原（surface HBV antigens,HBsAg）的相互作用及其在HBV感染肝细胞中的作用,以解释HBV吸附并进入细胞的机理,为基于病毒与宿主相互作用的新型抗HBV药物的开发提供理论依据。研究获得了以下主要结果:1.首次发现EREG和HBsAg存在相互作用,通过构建EREG的真核表达载体并将其转染肝细胞发现,转染EREG有助于HBsAg对细胞的吸附,因此推测它可以充当胞外可溶性辅助受体,帮助HBV与肝细胞结合,从而有利于HBsAg和膜上受体相互作用以使病毒进入肝细胞。2.采用免疫共沉淀技术,对HBsAg、FN和ASGPR之间的相互作用进行了验证,并将FN和ASGPR分段克隆表达,通过GST-pull down技术筛选了FN、ASGPR与HBsAg相互作用的功能域片段。结果显示FN主要通过其中央细胞结合域的N端及Ⅱ型肝素结合域（HeparinⅡ）与HBsAg相互作用,通过120kD细胞结合域与ASGPR相互作用。ASGPR主要通过其糖蛋白识别结构域（carbohydrate recognition domain,CRD）与FN的相互作用。但采用GST-pull down技术未能筛出ASGPR与HBsAg的互作区域,可能是原核表达的ASGPR功能域片段缺少修饰或实验中所用的相互作用条件不合适。综上所述,本研究证实了EREG、FN、ASGPR和HBsAg之间的相互作用,筛选了FN、ASGPR和HBsAg相互作用的功能域,并研究了EREG和HBsAg之间的相互作用及其与HBV进入肝细胞的关系,发现EREG在HBV和肝细胞结合的过程中起着胞外辅助性受体的作用。感染
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标签：表皮调节素论文; 纤联蛋白论文; 去唾液酸糖蛋白受体论文; 蛋白相互作用论文; 乙型肝炎病毒论文;