堆型艾美耳球虫免疫增强型核酸疫苗免疫保护机制病理学研究

论文摘要

鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于肠道所引起的一种危害极其严重的寄生虫病。以往控制和治疗鸡球虫病的方法是利用化学药物,但药物耐药性的产生往往造成药效降低,鸡球虫病仍然时常发生,严重影响鸡的生长及其生产性能发挥。近年来使用疫苗已成为养鸡业对球虫病的主要防控手段,而利用基因工程技术开发球虫疫苗更是成为热点。本实验利用常规病理学及超微病理学技术对鸡E. acervulina免疫增强型核酸疫苗对雏鸡的免疫反应及其保护作用进行研究,具体实验内容与结果如下:1.利用常规病理组织学方法,对E. acervulina感染后虫体的发育及小肠的病理变化规律进行观察。实验结果表明,感染E. acervulina雏鸡,精神沉郁,食欲饮欲下降,排白色黏液样便,小肠充血,肠壁变薄,苍白色,绒毛上皮细胞变性、坏死脱落。不同时期,细胞内含有发育不同阶段的多量虫体。2.利用免疫组化方法,对E. acervulina侵入肠道的途径及部位进行研究。实验结果表明,E. acervulina从小肠绒毛上皮细胞侵入,然后经绒毛内毛细血管进入肠腺,并在肠腺基底部开始继续发育,之后向肠腺开口处移行,而后移行至肠绒毛上皮细胞内,并从绒毛基底部开始,逐渐发展至绒毛上部,最后侵入整个绒毛。3.利用常规病理学和超微病理学方法,对构建的不同免疫增强型核酸疫苗的免疫保护作用病理学机制进行了研究。将纯化的四种真核表达质粒以及空载体质粒分别于14日龄经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,并将实验鸡共分为7组,21日龄各组鸡加强免疫一次,28日龄各组感染5×104个E. acervulina孢子化卵囊,对四种真核表达质粒免疫雏鸡后不同日龄及感染球虫后鸡的病理学变化进行了观察。实验结果表明,红对照组脾脏、胸腺淋巴细胞排列疏松,淋巴细胞数量减少;小肠损伤严重,肠绒毛断裂,绒毛上皮细胞变性、坏死脱落,出血严重,绒毛上皮细胞内感染大量虫体。3-1E-ChIL-15组（S组）、3-1E+cChIL-15组（C组）、3-1E+NChIL-15组（N组）、3-1E组（E组）四组脾脏、胸腺淋巴细胞密集程度明显增高,十二指肠及空肠的病理变化轻微,肠绒毛轻度损伤,虫体感染量减少。四组均有明显的免疫保护效果。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 鸡球虫的研究进展
• 1.2 鸡球虫的一般生活史
• 1.3 流行病学
• 1.4 临床表现
• 1.4.1 急性球虫病
• 1.4.2 慢性球虫病
• 1.5 防治
• 1.5.1 化学合成药
• 1.5.2 聚醚类离子载体抗生素
• 1.5.3 开发利用中草药
• 1.5.4 免疫预防
• 1.6 核酸疫苗概况
• 1.7 研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 病原
• 2.1.2 实验动物
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 虫体发育、小肠病理变化及免疫组化方法实验动物处理
• 2.2.2 免疫保护后病理组织学变化及超微组织学变化实验动物处理
• 2.2.3 被检材料采取
• 2.2.4 检验方法
• 3 结果
• 3.1 感染E. acervulina 后虫体发育及小肠病理变化
• 3.1.1 眼观临床表现
• 3.1.2 眼观病理变化
• 3.1.3 病理组织学变化
• 3.2 免疫组化实验
• 3.3 免疫保护后雏鸡各组织器官的病理变化
• 3.3.1 常规病理学变化实验
• 3.3.2 免疫保护后各器官超微结构变化的观察
• 4 讨论
• 4.1 E. acervulina 感染雏鸡后的发育情况及病理变化规律
• 4.2 E. acervulina 的进攻途径及准确部位
• 4.3 E. acervulina 核酸疫苗对各组织脏器的加强免疫保护规律
• 4.4 E. acervulina 核酸疫苗在超微结构的加强免疫保护规律
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文