论文摘要
为了建立聚乙二醇化天花粉蛋白注射液的质量标准和质控方法。首先,参照天花粉蛋白的检测方法、中国药典要求及新药注册指导原则,并结合聚乙二醇天花粉蛋白（PEG-TCS）的性质及其修饰过程在以下几个方面对聚乙二醇天花粉蛋白进行了质控方法学研究并拟定了相关标准:HPLC考察样品纯度方法建立与验证;聚乙二醇染色法对聚乙二醇化天花粉蛋白注射液中游离PEG检测方法建立;聚乙二醇化天花粉蛋白注射液中NaCNBH3残留考马斯亮蓝试剂法检测方法建立及与碘滴定法的比较;Lowry法测定聚乙二醇化天花粉蛋白中蛋白含量的专属性考察;小鼠引产活性考察聚乙二醇化天花粉蛋白注射液的体内活性的生物活性测定方法建立等.然后,根据质控方法学研究的结果及其他检测项目参照药典建立了聚乙二醇天花粉蛋白注射液的质量控制标准检测项目并对三批样品进行了检测:采用免疫印迹和聚乙二醇染色法对聚乙二醇化天花粉蛋白进行鉴别;用还原型SDS-PAGE法测定聚乙二醇化天花粉蛋白相对分子量;采用考马斯亮蓝试剂法对聚乙二醇化天花粉蛋白注射液中NaCNBH3残留进行检测;采用聚乙二醇染色法对聚乙二醇化天花粉蛋白注射液中游离PEG进行了检测;利用非还原型SDS-PAGE法、SEC-HPLC法对聚乙二醇化天花粉蛋白注射液的纯度进行了测定;小鼠引产活性考察聚乙二醇化天花粉蛋白注射液的体内活性,聚乙二醇化天花粉蛋白注射液外观、装量、等电点、紫外扫描、pH、细菌内毒素、无菌等其它指标按照《中国药典》三部的相关规定进行。HPLC考察纯度色谱条件下,PEG-TCS与TCS的分离度良好（≥2.0%）,回归方程为A=307.53C－371,r=0.9983表明TCS在5～50μg/ml浓度范围内线性关系良好,测得三批样品中残留的TCS均≤5μg/ml;非还原型SDS-PAGE电泳后采用聚乙二醇染色测得游离PEG残留量小于15μg/ml;Lowry法测得蛋白质含量为1.0mg/ml±0.15mg/ml,考马斯亮蓝试剂法检测NaCNBH3残留经方法学考察符合要求,且样品中无NaCNBH3残留,小鼠引产试验表明,经过PEG修饰后的TCS引产活性加强。聚乙二醇化天花粉蛋白的鉴别实验中的免疫印迹和聚乙二醇染色均为阳性,还原SDS-PAGE法测得聚乙二醇化天花粉蛋白相对分子量为54KD±5.4KD,聚乙二醇化天花粉蛋白注射液成品是无色澄明的液体,无肉眼可见不溶物,装量不少于1.0ml/支,符合《中国药典》三部附录I A中对装量的要求。pH值为3.0～5.5,无菌实验、细菌内毒素检查均阴性符合成品注射剂检测规定要求.综上所述,所建的质量控制标准可以有效控制和评价PEG-TCS的质量,PEG-TCS注射液成品的外观装量、理化性质、含量、有关物质残留、无菌实验、细菌内毒素含量、异常毒性实验等指标符合新药审批的技术要求。
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