几个马铃薯品种及杂交F1代PVY抗性的鉴定研究

论文摘要

马铃薯Y病毒侵染茄科、藜科、豆科的多种植物,并造成重大经济损失。针对马铃薯Y病毒的抗病毒育种是控制其危害的有效方法。抗马铃薯Y病毒病的种质资源是抗马铃薯Y病毒病育种的基础材料。本文采用分子标记和酶联免疫方法对收集的几个马铃薯品种及其F1代的PVY抗性进行了鉴定,以为其亲本选配和抗源累积提供参考,有利于培育出抗性更强、抗谱更广、抗病更持久的品种。试验过程得到如下结果:（1）对马铃薯PCR反应体系进行了优化,筛选出合适的引物,确定马铃薯PCR反应体系和扩增程序。反应体系为:10μL的反应体积中包括10×PCRBuffer1.95μL,dNTPs 0.25mmol/L0.2μL,TaqDNA聚合酶1μL,0.2μL0.5μmol/L引物0.2μL,50ngDNA模板。PCR扩增程序为:94℃预变性2min,然后94℃变性30s,45℃退火30s,72℃延伸1min,扩增35个循环后,最后72℃延伸5min。（2）运用分子标记和酶联免疫两种方法对抗马铃薯Y病毒病的种质资源进行鉴定。酶联免疫有效快速地鉴定马铃薯的抗病性,利用分子标记确定了一条与PVY抗性相关的标记,从DNA的基础上反映抗PVY的基因情况。两者的结果一致性达到了97%以上。（3）根据分子标记和酶联免疫两种检测结果进行分析,8个品种中,Monalisa、A11、F86、A12、Barbara、F92对马铃薯Y病毒病具有较强的抗性,不感病。Russette和Shepody对于马铃薯Y病毒容易感病。杂交组合中,亲本都是属于对马铃薯Y病毒具有抗性的Barbara和F86（R×R）,其88个F1代单株对马铃薯Y病毒病具有抗性。亲本为F86和Russette（R×S）杂交组合的113个F1代单株,103个单株抗病,10个单株感病。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 植物抗病性的研究进展
• 1.1.1 植物抗病基因的研究
• 1.1.1.1 R基因特性
• 1.1.1.2 R基因的应用
• 1.1.2 植物诱导抗病性
• 1.1.2.1 植物诱导抗病性的本质
• 1.1.2.2 植物诱导抗病性的主要类型
• 1.1.2.3 植物诱导抗病性的机理
• 1.2 马铃薯资源概况
• 1.3 马铃薯抗病毒病种质资源研究
• 1.3.1 研究马铃薯抗病毒种质资源的重要义
• 1.3.2 我国马铃薯抗病毒病种质资源研究现状
• 1.4 抗马铃薯Y病毒病（PVY）的研究进展
• 1.4.1 育种的研究进展
• 1.4.1.1 现存的植物抗源
• 1.4.1.2 创造新型抗病毒种质
• 1.4.2 马铃薯Y病毒与寄主互作的研究
• 1.5 种质资源鉴定的主要方法
• 1.5.1 形态学鉴定
• 1.5.2 细胞学鉴定
• 1.5.3 同工酶鉴定
• 1.5.4 种子贮藏蛋白鉴定
• 1.5.5 分子标记鉴定
• 1.6 分子标记技术在马铃薯抗PVY种质资源研究中的应用
• 1.6.1 分子标记在马铃薯种质资源研究中的应用
• 1.6.2 RAPD技术在马铃薯种质资源研究中的应用
• 1.7 RT-PCR检测技术
• 1.8 Elisa检测
• 1.9 立题依据、研究目的及主要内容
• 1.9.1 研究的依据和目的
• 1.9.2 研究的主要内容
• 1.9.3 技术路线
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 主要试剂及仪器
• 2.1.2.1 主要试剂
• 2.1.2.2 仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 植株种植与PVY接种
• 2.2.2 Elisa快速检测病毒
• 2.2.3 马铃薯叶片DNA的提取与检测
• 2.2.3.1 CTAB法提取马铃薯DNA
• 2.2.3.2 DNA纯度和浓度的检测
• 2.2.4 PCR扩增体系的建立
• 2.2.4.1 确定各反应条件
• 2.2.4.2 引物筛选
• 2.2.4.3 扩增产物的分离与检测
• 3 结果与分析
• 3.1 接种后的幼苗症状表现
• 3.2 酶联免疫的检测结果
• 3.3 马铃薯材料DNA的提取与检测
• 3.4 PCR反应程序优化与结果分析
• 3.4.1 引物筛选结果
• 3.4.2 PCR体系优化
• 3.4.3 PCR反应程序的退火温度梯度试验
• 3.4.4 优化后的PCR检测结果分析
• 3.4.5 PCR检测结果与酶联免疫检测比较
• 4 讨论与结论
• 4.1 讨论
• 4.1.1 DNA提取
• 4.1.2 PCR体系中各试剂对PCR产物的影响
• 4.1.3 PCR结果的稳定性和可重复性
• 4.1.4 酶联免疫检测
• 4.1.5 抗性品种的培育
• 4.2 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介