论文摘要
冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病，coronary artery disease，CAD）是一种威胁人体健康的重要疾病，其发病率和死亡率逐年上升。流行病学调查显示冠心病与多种遗传因素有关，尤其是参与脂代谢的多个基因在冠心病的发生发展中起着重要作用，这是因为血脂紊乱是导致冠心病发生发展病理演变的必要前提。前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶／西布曲明9a型（porprotein convertase subtilisin／kexin 9，PCSK9）是新近发现的涉及常染色体显性高胆固醇血症（Autosomal-dominant hypercholesterolemia，ADH）的第三个基因。ADH以高血浆LDL水平为主要特点，被认为是冠心病的风险因子。随着人类基因组测序的完成，研究与疾病表型相关的序列变异已成为现代医学的一个主要课题。单核苷酸多态性（Single-nucleotide polymorphism,SNP）作为第三代遗传标记，具有数量大，分布广的特点。在群体水平上系统地筛查鉴定SNP，特别是编码区和基因调控区的SNP，并通过病例-对照研究（case—control study），有可能获得与疾病相关联的SNP位点或单倍型。这对于阐明某些复杂的多基因疾病发病机理具有重要意义。本课题通过对中国四川地区汉族CAD患者和正常个体中PCSK9基因已知SNP的研究，比较它在CAD患者和正常对照人群中的分布、与血脂水平的关系、与冠心病病变严重程度以及预后情况，以期揭示PCSK9基因与脂代谢紊乱及冠心病的关系，并阐明其在冠心病发生、发展、预后中的作用。首先，我们采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）方法研究了四川地区汉族人群中184例正常人和212例CAD患者PCSK9基因的已知SNP位点E670G（23968A＞G）的分布频率，并初步探讨了它与脂代谢及冠心病的关系。其后，用PCR-RFLP方法进行分析，通过测序进行验证。然后，对该SNP与脂代谢和CAD的相关性进行了统计学分析。对已知SNP位点（E670G）的研究结果显示，中国四川地区汉族健康人群中该等位基因的频率分别为94.3％（23968A）和5.7％（23968G），而CAD患者组中分别为87.7％（23968A）和12.3％（23968G）；根据国外文献报道，在北美CAD患者人群中，两种等位基因的频率分别为94.4％（23968A）和5.6％（23968G）；而在德国CAD患者人群中，两种等位基因的频率分别为94.2％（23968A）和5.8％（23968G）；经统计学分析，中国四川地区汉族人群CAD患者与欧美CAD患者人群相比，该位点等位基因频率分布明显升高，存在统计学差异（P＜0.05）；基因型频率方面相比较，也有统计学差异（P＜0.05）。中国四川地区汉族人群中，CAD患者间该位点等位基因频率分布较健康人群明显升高，存在统计学差异（P＜0.05），基因型频率分布也存在统计学差异（P＜0.05）；CAD患者组中AA和GG基因组之间TG、CHOL、LDL-C的差异具有统计学意义（P＜0.05），AA和AG基因组之间TG的差异具有统计学意义（P＜0.05）；CAD患者组中AG基因型的冠脉病变支数、出院后心血管事件与AA基因型相比其差异具有统计学意义（P＜0.05）；GG基因组住院年龄最小，与AA基因型相比其差异具有统计学意义（P＜0.05）。