委陵菜黄酮类成分的含量测定及降血糖活性研究

论文摘要

中药委陵菜（Potentilla chinensis Ser.）为蔷薇科（Rosaceae）委陵菜属（PotentillaL）植物的干燥全草,在全国大部分地区都有分布,药材主产于山东、辽宁、安徽。其化学成分主要含有黄酮类、三萜类、甾体类、酚类及其衍生物,具有清热解毒,凉血止痢等功效,用于赤痢腹痛、久痢不止、痔疮出血、痈肿疮毒,是被中华人民共和国药典（2005版）收录的唯一一种委陵菜属植物。目前,由于委陵菜与其近缘植物翻白草（Potentilla discolor Bge.）的植物形态特征非常相似,民间将这两种药用植物混用来治疗2型糖尿病。据文献报道翻白草具有较好的降血糖药理活性,且降血糖作用十分明确。本课题组在前期的研究中发现,从委陵菜中分离得到的化合物与翻白草中分离得到的化合物种类相似。为了探究民间将委陵菜与翻白草混用来治疗糖尿病是否有科学依据,本文对委陵菜进行了降血糖药理活性的筛选。本文对降血糖活性较强的委陵菜乙酸乙酯萃取部位进行了分离、提取及结构鉴定。采用快速减压柱层析、硅胶开放柱色谱、ODS反相柱色谱及SephadexLH-20凝胶过滤等手段分离得到了3个化合物,鉴定结构为芹菜素、槲皮素和翻白叶苷A。建立了高效液相色谱同时测定委陵菜中3中黄酮类成分（槲皮素、翻白叶苷A、芹菜素）的含量分析方法。以ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150mm,5μm）为色谱柱,甲醇-0.3%磷酸水溶液（51:49）为流动相,0.9 mL/min的流速在360 nm检测波长下进行检测。结果,槲皮素、翻白叶苷A和芹菜素的进样量分别在0.72-10.08μg/mL（r=0.999 9）、0.86-12.04μg/mL（r=0.999 9）和0.54-7.56μg/mL（r=0.9999）范围内与其峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为95.37%（RSD=1.79%）、96.87%（RSD=1.63%）和97.66%（RSD=2.08%）,药材中三中黄酮的含量分别为100.0μg/g、323.0μg/g和55.0μg/g。建立起来的委陵菜黄酮类成分的含量测定方法为委陵菜的质量控制奠定基础。槲皮素、翻白叶苷A和芹菜素为评价指标,考察乙醇浓度（A）、提取时间（B）、溶剂用量（C）、提取次数（D）四个因素,三个水平,应用L9（34）正交设计实验方案优化了委陵菜总黄酮的提取工艺。初步的抗糖尿病药效学研究表明,委陵菜的不同方法提取物均对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠有不同程度的降血糖活性。其中,委陵菜水提液和乙酸乙酯萃取部分的降血糖活性具有显著性差异。本科课题不仅丰富了对委陵菜降血糖有效部位的确定、黄酮类成分含量测定研究及总黄酮提取工艺的研究,而且为进一步研究开发委陵菜中药资源提供了科学依据。本课题为基金项目:上海SK研究与发展基金（2003010-t）

论文目录

• 学位论文答辩委员会签字
• 摘要
• Abstract
• 委陵菜样本图片
• 第一章 绪论
• 第二章 委陵菜化学成分的提取、分离及鉴定
• 2.1 仪器与材料
• 2.2 提取与分离
• 2.2.1 分离流程图
• 2.3 化合物的结构鉴定
• 第三章 委陵菜中黄酮类成分含量测定方法的研究
• 3.1 仪器与材料
• 3.2 委陵菜中3种黄酮类成分的含量测定
• 3.2.1 色谱条件
• 3.2.2 样品溶液的制备
• 3.2.3 线性关系考察
• 3.2.4 精密度试验
• 3.2.5 稳定性实验
• 3.2.6 重现性考察
• 3.2.7 加样回收率试验
• 3.2.8 样品含量测定
• 3.3 讨论
• 第四章 委陵菜总黄酮提取工艺的研究
• 4.1 仪器与材料
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 药材的前处理
• 4.2.2 委陵菜总黄酮提取工艺的优选
• 4.2.3 验证试验
• 第五章 委陵菜提取物对降血糖活性研究
• 5.1 仪器与材料
• 5.2 委陵菜提取物对四氧嘧啶所致糖尿病模型的影响
• 5.2.1 实验动物
• 5.2.2 实验方法
• 5.2.3 实验结果
• 5.3 委陵菜提取物对自发性糖尿病GK大鼠血糖的影响
• 5.3.1 实验动物
• 5.3.2 实验方法
• 5.3.3 实验结果
• 5.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 附录A（攻读硕士学位期间发表论文目录）
• 附录B（谱图）