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鸡油菌多糖提取、纯化及其生物活性的研究

2020-12-09阅读(639)

鸡油菌多糖提取、纯化及其生物活性的研究

论文摘要

鸡油菌（Cantharelles cibarius）别名黄丝菌、杏菌,是一种外生根真菌,是世界著名的野生食用菌,在我国主要分布在云南、四川、贵州、西藏等省。研究表明,鸡油菌富含胡萝卜素、VA、VC和钙、铁、磷等多种矿物质元素,具有丰富的营养价值及特殊的药用保健功效。本课题以鸡油菌为原料,采用热水浸提法提取鸡油菌多糖,并对得到的粗多糖进行分离纯化,进一步研究了鸡油菌多糖的性质及组分、鸡油菌多糖的抗氧化活性及其降血糖作用,为拓展鸡油菌多糖的应用提供理论依据和基础数据。（1）以鸡油菌为原料,分别对热水浸提和微波法浸提鸡油菌多糖的最佳提取工艺进行了研究。在单因素实验的基础上,通过正交实验研究了浸提温度、浸提时间、液料比对鸡油菌多糖提取率的影响。结果显示,热水浸提法的最佳工艺为:液料比20:1,浸提时间2h,浸提温度85℃,在此条件下多糖的得率可达8.93%。通过实验确定的微波提取最佳工艺条件为:微波功率600W,微波时间35min,微波浸提温度85℃,液料比55:1,在此条件下,粗多糖得率为10.19%。对两种提取方法进行比较,结果显示,微波法比热水浸提取法具有较高的多糖提取得率,微波法能提高粗多糖得率14.1%。（2）用微波法提取制备的鸡油菌粗多糖,经Sevage法脱蛋白质,大孔树脂脱色,透析并经DEAE-52分离后得到一个主要组分CCP-2,冷冻干燥后为白色粉末,经SephdexG-100凝胶层析分析为鸡油菌多糖纯品。（3）通过对鸡油菌多糖红外光谱的特征吸收进行解析,结果表明,鸡油菌多糖含有羧基,是一种酸性多糖。HPLC结果表明:鸡油菌单糖组成包括甘露糖、葡萄糖、D-半乳糖和L-阿拉伯糖4种单糖,由峰面积归一化计算可知,甘露糖、葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖4种单糖的物质的量之比为42. 79:49. 56:1. 75:3. 78。（4）通过测定鸡油菌多糖的还原性及对羟自由基（·OH）以及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH·）的清除能力,研究了鸡油菌多糖的抗氧化性。结果表明,鸡油菌多糖具有一定的还原能力;在实验浓度范围内,鸡油菌多糖对·OH以及DPPH·都具有较强的清除作用,清除能力随多糖浓度的增大而增大。在浓度相同的情况下,鸡油菌多糖对·OH的清除能力比对照组VC稍弱,对DPPH·的清除能力强于VC。纯化后的鸡油菌多糖对·OH和DPPH·的清除能力不如鸡油菌多糖粗品,但其清除能力仍具有显著性。（5）通过动物实验,研究鸡油菌多糖的降血糖作用。对实验小鼠灌胃3种剂量的鸡油菌多糖,灌胃低、中、高剂量组（100mg/kg*d、200mg/kg*d和400mg/kg*d）的小鼠血糖值均显著性降低（ P<0.01） ,降糖率分别达到15.9%、23.9%和29.2%,说明鸡油菌多糖具有一定的降血糖功效。检测小鼠肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的结果显示,灌胃鸡油菌多糖4周后,药物对照组、实验低、中、高剂量组的小鼠肝脏SOD活性和GSH-Px活性明显高于糖尿病对照组的值（P<0.05）,而肝脏MDA含量明显低于糖尿病对照组（P<0.01）,说明鸡油菌多糖可以提高小鼠机体SOD的活性,并抑制脂质过氧化作用。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 1.1 鸡油菌概况
  • 1.1.1 鸡油菌
  • 1.1.2 鸡油菌的食用价值和药用功能
  • 1.2 国内外真菌多糖研究概况
  • 1.2.1 真菌多糖提取的研究
  • 1.2.2 真菌多糖分离纯化研究
  • 1.2.3 真菌多糖抗氧化性研究
  • 1.2.4 真菌多糖生物活性研究
  • 1.2.5 菌类多糖在食品工业的应用
  • 1.3 研究背景
  • 1.4 本课题的研究意义与目的
  • 1.5 本课题研究内容
  • 第二章 鸡油菌多糖提取方法的研究
  • 2.1 引言
  • 2.2 实验材料与仪器
  • 2.3 实验方法
  • 2.3.1 鸡油菌主要成分的测定
  • 2.3.2 常规热水提取工艺
  • 2.3.3 微波提取工艺条件
  • 2.3.4 多糖测定方法研究
  • 2.4 结果与讨论
  • 2.4.1 鸡油菌子实体主要成分的测定结果
  • 2.4.2 热水提取工艺条件的影响
  • 2.4.3 热水提取工艺条件正交实验
  • 2.4.4 微波提取工艺单因素实验结果
  • 2.4.5 微波提取工艺条件的正交实验
  • 2.4.6 两种浸提工艺的比较
  • 2.5 本章小结
  • 第三章 鸡油菌多糖脱蛋白及脱色的研究
  • 3.1 引言
  • 3.2 实验材料与仪器
  • 3.3 实验方法
  • 3.3.1 鸡油菌粗多糖脱蛋白
  • 3.3.2 鸡油菌粗多糖脱色
  • 3.3.3 透析除去小分子杂质
  • 3.3.4 鸡油菌多糖沉淀方法研究
  • 3.4 分析方法
  • 3.4.1 蛋白质含量测定
  • 3.4.2 多糖含量测定
  • 3.4.3 脱色率的测定
  • 3.5 结果与讨论
  • 3.5.1 TCA 法测定结果
  • 3.5.2 SEVAGE 法脱蛋白的效果
  • 3.5.3 大孔树脂吸附法脱色
  • 3.5.4 醇沉终浓度对鸡油菌多糖得率的影响
  • 3.6 本章小结
  • 第四章 鸡油菌多糖的纯化及组分的初步分析
  • 4.1 引言
  • 4.2 实验材料与仪器
  • 4.3 实验方法
  • 4.3.1 鸡油菌多糖的 DEAE-52 纤维素柱层析
  • 4.3.2 鸡油菌多糖的 SEPHADEXG-100 柱层析
  • 4.3.3 鸡油菌多糖一般理化性质测定方法
  • 4.3.4 CCP-2 紫外吸收光谱分析
  • 4.3.5 CCP-2 红外光谱分析
  • 4.3.6 多糖组成的 HPLC 分析
  • 4.4 结果与讨论
  • 4.4.1 鸡油菌多糖 DEAE-52 纤维素柱层析结果与分析
  • 4.4.2 鸡油菌多糖 SEPHADEXG-100 柱层析
  • 4.4.3 鸡油菌多糖 CCP-2 的理化性质研究
  • 4.4.4 鸡油菌菌多糖 CCP-2 的紫外扫描
  • 4.4.5 鸡油菌多糖 CCP-2 红外光谱测定
  • 4.4.6 鸡油菌多糖 CCP-2 的组分分析
  • 4.5 总结
  • 第五章 鸡油菌多糖抗氧化性质研究
  • 5.1 引言
  • 5.2 实验材料与仪器
  • 5.3 实验方法
  • 5.3.1 还原能力的测定
  • 5.3.2 清除·OH 自由基
  • 5.3.3 清除 DPPH·自由基
  • 5.4 结果与讨论
  • 5.4.1 还原能力测定的结果
  • 5.4.2 对·OH 的清除作用的实验结果
  • 5.4.3 鸡油菌多糖对 DPPH·的清除作用
  • 5.5 小结
  • 第六章 鸡油菌多糖降血糖作用研究
  • 6.1 引言
  • 6.2 实验材料与仪器
  • 6.3 实验方法
  • 6.3.1 糖尿病动物模型建立
  • 6.3.2 动物分组及处理
  • 6.3.3 指标的测定
  • 6.3.4 数据的分析
  • 6.4 结果与讨论
  • 6.4.1 小鼠生理状态
  • 6.4.2 鸡油菌多糖对正常小鼠血糖的影响
  • 6.4.3 鸡油菌多糖对糖尿病小鼠血糖的影响
  • 6.4.4 鸡油菌多糖对糖尿病小鼠体内酶活性的影响
  • 6.5 小结
  • 第七章 结论
  • 参考文献
  • 科研情况说明
  • 致谢

    • 相关论文文献

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