RNAi转基因家蚕抑制BmNPV的抗性研究

论文摘要

已有研究表明利用RNAi技术通过干扰BmNPV复制的必需基因ie-1、lef-1和gp64,可以有效抑制BmNPV的增殖。然而,由于选择干扰的靶基因不同,抑制病毒复制的效率相差甚远,即时对于同一个基因,针对不同区域的siRNA其效率也有很大差异。为了探讨表达不同dsRNA的转基因家蚕对BmNPV的抗性,将已构建的带有短lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo,通过精子介导法导入家蚕（皓月）体内,通过GFP荧光和G418抗性双重筛选,结合PCR、点杂交等分子生物学鉴定获得了转基因家蚕。对G6代2龄转基因家蚕接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比对照组下降了10%-30%,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕的定量PCR检测结果显示转基因家蚕体内的lef-1 mRNA水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。同时,为了研究不同品系转基因家蚕对BmNPV的抗性,将带有长ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-IE-Neo通过精子介导法导入家蚕（菁松）体内,对G1代研究结果表明抑制BmNPV的增殖。另外,我们还对菁松、皓月、苏菊（A、B系）、明虎（A、B系）和高白×皓月的这五种品系的二龄起蚕进行攻毒实验,同时与上述两种转基因家蚕进行抗性比较。研究结果表明不同品种的家蚕对病毒的抗性存在差异,但是总体上转基因家蚕比其它品种对病毒的抗性都要高。进一步证明了通过转基因技术可以增强家蚕对病毒的抗性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 RNAi 的研究进展
• 1 RNAi 研究的历史历程
• 2 RNAi 的分子机制和生物学特性
• 3 RNAi 的技术及其应用前景
• 参考文献
• 第二章 转基因家蚕的研究进展
• 1 引言
• 2 家蚕转基因技术方法
• 3 转基因蚕研究中所采用的报告基因
• 参考文献
• 第三章 基于RNAi 抑制Bm NPV 增殖的研究进展
• 1 引言
• 2 家蚕抗BmNPV 育种的研究进展
• 3 RNAi 抗病育种的前景
• 参考文献
• 第二部分 正文
• 第四章 研究目的与研究内容
• 1 研究目的及意义
• 2 研究内容
• 3 主要研究技术路线
• 第五章 实验材料与实验方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 常用仪器
• 第六章 表达短lef-1 dsRNA 转基因家蚕抑制BmNPV 增殖及遗传稳定性的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 第七章 表达长ie-1 dsRNA 转基因家蚕抑制BmNPV 增殖的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 第八章 属地不同品种家蚕的Bm NPV 抗性比较
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 结论
• 1 已取得的成果
• 2 有待进一步研究的问题
• 攻读学位期间发表的论文
• 致谢