论文题目: 山羊早期胚胎发育基因表达的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 动物遗传育种与繁殖
作者: 李拥军
导师: 赵有璋,敖红
关键词: 山羊,胚胎,基因表达,发育阻滞,单胚差异显示
文献来源: 甘肃农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 为了解山羊早期胚胎发育基因表达的分子机制,建立不同发育阶段基因表达的模式,探讨体外培养胚胎发育阻滞形成的分子机理,进行了三个方面的研究:1.单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法建立的研究用昆明种小白鼠作为实验材料,通过超数排卵处理后获得小鼠早期发育的4细胞和8细胞期胚胎。通过单个鲜胚和冷冻胚胎的RT-PCR反应产物的凝胶电泳图谱及持家基因的扩增检测,表明冻胚和鲜胚具有相同的实验结果。用银染法取代同位素法,可以显示特异表达的条带,并避免了放射性污染。用一步法和煮沸法取代乙醇糖原法回收特异条带,操作简便,程序简化,经过二次扩增、回收、差异条带的亚克隆、提取质粒及酶切鉴定等环节,证明回收方法有效。用所建立的差显方法获得了一条在小鼠8细胞期胚胎特异表达的片段,经过测序及比对分析,表明与鼠2号染色体上RP23-20A6 mRNA克隆具有100%同源性。结果表明:单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法有效、实用、可靠,可用于动物早期胚胎发育基因表达的研究。2.体外培养的山羊早期胚胎发育基因表达的研究通过卵母细胞的体外成熟、体外受精和体外培养方法,获取山羊早期发育的2细胞、4细胞和8～16细胞期胚胎。通过单个冷冻胚胎银染mRNA差异显示方法,共筛选到16条在不同时期胚胎特异表达的片段,其中2细胞期5条带,4细胞期4条带,8～16细胞期7条带。经过测序及比对分析,表明有4条带与已知的功能基因或调控基因相似,5条带为未知功能基因,7条带无相似基因。其中:A21条带在2细胞期胚胎特异表达,相似于人类肽基精氨酸脱亚胺酶(PAD)基因(83%);B43条带在4细胞期胚胎特异表达,相似于牛胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因(88%);A86条带在8～16细胞期胚胎特异表达,相似于牛NADH脱氢酶1α亚复合体4(NDUFA4)基因(97%);B83条带在8～16细胞期胚胎特异表达,相似于犬细胞周期蛋白B3(CCNB3)基因(82%)。
论文目录:
摘 要
SUMMARY
第一章 文献综述
1. 动物早期胚胎发育的基因表达
2. mRNA 差异显示技术及其用于动物早期胚胎发育基因研究的进展
3. 本研究的目的和意义
第二章 单胚mRNA 差异显示技术中的基本实验材料和主要实验方法
1. 主要仪器设备
2. 所用常规试剂及试剂盒
3. 常规溶液及试剂配制
4. 实验方法
第三章 单个冷冻胚胎银染mRNA 差异显示方法的建立
1. 前言
2. 材料和方法
3. 结果与分析
4. 讨论
5. 结论
第四章 体外培养的山羊早期胚胎发育基因表达的研究
1. 前言
2. 材料和方法
3. 结果与分析
4. 讨论
5. 结论
第五章 山羊体内外特定发育阶段胚胎基因差异表达的研究
1. 前言
2. 材料和方法
3. 结果与分析
4.讨论
5.结论
致 谢
参考文献
附录:差异表达片段的测序结果及序列对比结果
在读期间发表的论文(著)
个人简介
导师简介
发布时间: 2007-03-12
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