论文摘要
目的:1、基于癌干细胞的耐药性,通过CTX体内干预连续传代的方法富集肾上腺皮质癌干细胞并评估其效率,为寻找肾上腺皮质癌干细胞提供更多选择的途径。2、探讨肾上腺皮质癌干细胞相关标志物在CTX富集获得的各代细胞中的表达水平,以寻找肾上腺皮质癌干细胞的特异性表面标志物,为今后分离癌干细胞提供实验基础。方法:1、将人肾上腺皮质癌SW-13细胞株种植于裸鼠皮下,形成的异种移植瘤在裸鼠体内连续传代,同时给予化疗药CTX富集肾上腺皮质癌干细胞。2、评估CTX富集癌干细胞的效率:运用悬浮球实验检测所富集到的细胞的自我更新能力,单细胞及平板克隆形成实验检测其克隆形成能力,MTT法检测其增殖的能力。3、流式细胞法分析所富集到的三代细胞癌干细胞相关标志物CD133、ABCG2和CXCR4的表达水平。结果:1、CTX富集得到的三代细胞及对照组细胞的单细胞克隆形成率分别为（58.67±2.31）%、（75.00±3.61）%、（79.00±2.00）%和（43.33±3.06）%,平板克隆形成率分别为（349.67±12.99）‰、（449.33±42.70）‰、（618.67±24.58）‰和（196.33±24.46）‰,悬浮球形成率分别为（1.52±0.29）%、（4.17±0.41）%、（5.41±0.90）%和（0.37±0.11）%,经CTX富集的三代细胞在单细胞克隆形成率、平板克隆形成率、悬浮球形成率等均高于对照组（P<0.05）;细胞生长曲线提示,经CTX富集的三代细胞增殖能力强于对照组细胞（P<0.05）。2、在CTX富集获得的三代细胞与对照组细胞中,CD133为阴性表达;ABCG2 的表达率分别为（98.03±1.35）%、（92.86±5.33）%、（89.40±5.27）%和（87.09±12.34）%,组间两两比较（P>0.05）;CXCR4的表达率分别为（22.77±1.11）%、（40.93±2.33）%、（87.41±3.78）%和（27.85±12.71）%,第三代细胞CXCR4的表达率高于对照组（P<0.05）。结论:1、CTX干预后连续传代法可以提高癌干细胞在肾上腺皮质癌中的比例。2、CXCR4在第三代细胞中高表达,其可作为肾上腺皮质癌干细胞分选的候选指标。