非小细胞肺癌组织中EGFR基因突变及信号传导蛋白AKT、ERK磷酸化的表达及临床意义

论文摘要

目的检测非小细胞肺癌组织中表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR）突变和EGFR下游关键蛋白丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（蛋白激酶B）（protein kinase B, PKB, AKT）及磷酸化细胞外信号调节激酶（phospho-extracellular signal-regulated kinase, ERK）磷酸化表达,研究上述变化与性别、年龄、吸烟及预后等临床因素之间的关系。为非小细胞肺癌个体化靶向治疗的研究提供新的依据。方法（1）收集湘雅医院2003年9月至2010年7月间手术切除并经病理确诊的原发性非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Carcinoma, NSCLC）病例103例,冰冻和福尔马林分别保存活检组织。所有入选患者术前均未接受过化疗或放疗等任何抗肿瘤治疗。（2）收集所有患者的临床病理资料,并对患者进行电话或通信随访,获得随访资料。（3）将标本解冻后对所有的肿瘤组织用PCR-直接测序法（PCRand direct sequencing method）检测肺癌组织中EGFR基因第19和21外显子突变；免疫组织化学技术（immunohistochemistry, IHC）链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（streptavidin-peroxidase, S-P）检测肺癌组织中的p-AKT、p-ERK蛋白表达。（4）对病例资料、实验结果、生存分析应用SPSS17.0软件进行统计学分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果（1） EGFR基因突变情况：PCR扩增产物测序结果显示突变的肿瘤组织DNA中可同时检测出突变序列和野生型序列。103例NSCLC患者肿瘤组织中共有34例存在EGFR基因突变。其中,19号外显子突变有4种突变类型均为缺失突变,突变数为24例。第21号外显子突变均为第2573位点突变（L858R）,突变数为10例。在性别、年龄、原发病灶、区域淋巴结分期、远处转移和国际分期中不同的病例组中EGFR基因突变的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。在不同的吸烟史及病理学类型的病例的表达差异有统计学意义（P<0.05）。（2） EGFR下游信号传导蛋白AKT磷酸化的表达结果：p-AKT表达总阳性率为56.3%,EGFR突变患者中p-AKT阳性率（44.8%）显著高于无突变者的阳性率（17.8%）,差异有统计学意义（P<0.05）；在性别、年龄、原发病灶、区域淋巴结分期、远处转移和国际分期病例中不同的病例中p-AKT的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。在不同的吸烟史及病理学类型的病例的表达差异有统计学意义（P<0.05）。（3） EGFR下游信号传导蛋白ERK磷酸化的表达结果：p-ERK的表达阳性率为30.1%,在不同的性别、吸烟史、原发病灶和国际分期病例中p-ERK的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。在年龄、区域淋巴结分期、远处转移及病理学类型不同的病例中的表达差异有统计学意义（P<0.05）。（4）EGFR基因突变和AAKT、ERK磷酸化的表达不同的患者总生存（Overall survival, OS）差异均无统计学意义（P>0.05）。结论1.非小细胞肺癌组织中存在EGFR基因突变,并且信号传导通路下游关键分子AKT及ERK磷酸化呈高表达。2.吸烟可能使EGFR的19和21位点的基因突变率降低和EGFR的下游关键蛋白AKT的磷酸化增加。3. ERK磷酸化的表达提示非小细胞肺癌的恶性度高,易发生侵袭和转移,但生存分析未显示ERK磷酸化的表达与OS存在相关性。4.非小细胞肺癌EGFR基因突变、AKT磷酸化表达与OS无明显相关；但EGFR基因突变与AKT磷酸化的表达相关,提示EGFR基因突变对NSCLC（?）中瘤组织中PI3K-PKC-IKK信号通路中关键蛋白AKT磷酸化有影响。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 缩略词简表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 1. 材料与主要试剂与仪器
• 2. 实验方法与步骤
• 3. 统计学处理
• 第三章 结果
• 1. EGFR基因突变的结果
• 2. 免疫组化结果
• 3. 病理学资料及随访的临床结果
• 4. EGFR基因突变、AKT和ERK蛋白的磷酸化的表达与临床因素的关系
• 5. EGFR基因突变和AKT、ERK磷酸化表达的关系
• 6. EGFR基因突变、AKT和ERK磷酸化表达与患者预后的关系
• 第四章 讨论
• 1. EGFR基因突变
• 2. AKT蛋白磷酸化的表达
• 3. ERK蛋白磷酸化的表达
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间主要的研究成果