本文主要研究内容
作者董丹丹（2019）在《核仁素抑制小反刍兽疫病毒复制的分子机制》一文中研究指出：小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)引起的一种急性、高度传染性、致命性疾病,主要感染偶蹄小反刍动物。该病主要表现为发热,口腔炎,肺炎,结膜炎,眼鼻粘膜脓性分泌物,严重腹泻,高发病率和死亡率。PPRV属于副黏病毒科麻疹病毒属,其基因组编码6个结构蛋白和2个非结构蛋白。虽然PPRV各蛋白的结构、功能等分子生物学的相关研究已经取得进展,但其分子致病机制和免疫机制仍然缺乏相关信息。而病原与宿主的互作是研究其分子致病机制的途径,目前PPRV该方面的研究比较少。本论文以病毒与宿主蛋白的互作为切入点,研究核仁素在小反刍兽疫病毒复制过程中的作用及其机制。PPRV N蛋白高度保守且免疫原性最高,在病毒复制和细胞趋向性中发挥重要作用。另外,PPRV N蛋白与许多宿主调节因子相互作用。因此,本研究旨在通过免疫共沉淀实验及质谱分析筛选与PPRV N蛋白互作的宿主蛋白。我们成功的筛选到了宿主分子核仁素(NCL),随后通过Co-IP、GST-pull down实验进一步证实了NCL与N蛋白的直接相互作用。激光共聚焦实验结果显示NCL与PPRV N蛋白共定位于细胞核内。通过构建PPRV N蛋白及NCL的截短真核表达质粒并分别进行Co-IP实验,我们成功鉴定了N蛋白与NCL互作的功能域。实验结果证明核仁素的CTD域介导其与N蛋白的相互作用,而N蛋白的NTD域介导其与NCL的相互作用。其次,我们利用慢病毒包装系统成功构建了NCL过表达细胞系,为研究NCL在PPRV生长过程中的作用奠定了基础。当在Vero-SLAM细胞过表达NCL时,PPRV N蛋白的表达量降低、病毒基因组拷贝数减少且病毒滴度降低;而通过siRNA下调内源性NCL后,PPRV N蛋白的表达量增加、PPRV的基因组拷贝数增加且病毒滴度上升。由此可见,NCL在PPRV复制过程中发挥负调控作用。并且,我们通过双荧光素酶实验初步发现NCL促进IFN-β的产生。综上所述,本研究首次发现NCL与PPRV N蛋白相互作用,并且NCL是PPRV复制过程中的一个负调控因子。我们的研究结果表明NCL可能通过调控PPRV的复制而影响PPRV的发病机制,这将有助于我们了解PPRV的感染机制。
Abstract
xiao fan chu shou yi (Peste des Petits Ruminants,PPR)shi you xiao fan chu shou yi bing du (Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)yin qi de yi chong ji xing 、gao du chuan ran xing 、zhi ming xing ji bing ,zhu yao gan ran ou ti xiao fan chu dong wu 。gai bing zhu yao biao xian wei fa re ,kou qiang yan ,fei yan ,jie mo yan ,yan bi nian mo nong xing fen bi wu ,yan chong fu xie ,gao fa bing lv he si wang lv 。PPRVshu yu fu nian bing du ke ma zhen bing du shu ,ji ji yin zu bian ma 6ge jie gou dan bai he 2ge fei jie gou dan bai 。sui ran PPRVge dan bai de jie gou 、gong neng deng fen zi sheng wu xue de xiang guan yan jiu yi jing qu de jin zhan ,dan ji fen zi zhi bing ji zhi he mian yi ji zhi reng ran que fa xiang guan xin xi 。er bing yuan yu su zhu de hu zuo shi yan jiu ji fen zi zhi bing ji zhi de tu jing ,mu qian PPRVgai fang mian de yan jiu bi jiao shao 。ben lun wen yi bing du yu su zhu dan bai de hu zuo wei qie ru dian ,yan jiu he ren su zai xiao fan chu shou yi bing du fu zhi guo cheng zhong de zuo yong ji ji ji zhi 。PPRV Ndan bai gao du bao shou ju mian yi yuan xing zui gao ,zai bing du fu zhi he xi bao qu xiang xing zhong fa hui chong yao zuo yong 。ling wai ,PPRV Ndan bai yu hu duo su zhu diao jie yin zi xiang hu zuo yong 。yin ci ,ben yan jiu zhi zai tong guo mian yi gong chen dian shi yan ji zhi pu fen xi shai shua yu PPRV Ndan bai hu zuo de su zhu dan bai 。wo men cheng gong de shai shua dao le su zhu fen zi he ren su (NCL),sui hou tong guo Co-IP、GST-pull downshi yan jin yi bu zheng shi le NCLyu Ndan bai de zhi jie xiang hu zuo yong 。ji guang gong ju jiao shi yan jie guo xian shi NCLyu PPRV Ndan bai gong ding wei yu xi bao he nei 。tong guo gou jian PPRV Ndan bai ji NCLde jie duan zhen he biao da zhi li bing fen bie jin hang Co-IPshi yan ,wo men cheng gong jian ding le Ndan bai yu NCLhu zuo de gong neng yu 。shi yan jie guo zheng ming he ren su de CTDyu jie dao ji yu Ndan bai de xiang hu zuo yong ,er Ndan bai de NTDyu jie dao ji yu NCLde xiang hu zuo yong 。ji ci ,wo men li yong man bing du bao zhuang ji tong cheng gong gou jian le NCLguo biao da xi bao ji ,wei yan jiu NCLzai PPRVsheng chang guo cheng zhong de zuo yong dian ding le ji chu 。dang zai Vero-SLAMxi bao guo biao da NCLshi ,PPRV Ndan bai de biao da liang jiang di 、bing du ji yin zu kao bei shu jian shao ju bing du di du jiang di ;er tong guo siRNAxia diao nei yuan xing NCLhou ,PPRV Ndan bai de biao da liang zeng jia 、PPRVde ji yin zu kao bei shu zeng jia ju bing du di du shang sheng 。you ci ke jian ,NCLzai PPRVfu zhi guo cheng zhong fa hui fu diao kong zuo yong 。bing ju ,wo men tong guo shuang ying guang su mei shi yan chu bu fa xian NCLcu jin IFN-βde chan sheng 。zeng shang suo shu ,ben yan jiu shou ci fa xian NCLyu PPRV Ndan bai xiang hu zuo yong ,bing ju NCLshi PPRVfu zhi guo cheng zhong de yi ge fu diao kong yin zi 。wo men de yan jiu jie guo biao ming NCLke neng tong guo diao kong PPRVde fu zhi er ying xiang PPRVde fa bing ji zhi ,zhe jiang you zhu yu wo men le jie PPRVde gan ran ji zhi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的董丹丹，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于小反刍兽疫病毒论文,蛋白论文,核仁素论文,复制论文,干扰素论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：小反刍兽疫病毒论文; 蛋白论文; 核仁素论文; 复制论文; 干扰素论文; 中国农业科学院2019-07-05论文;