论文摘要
目的：建立河南猪株旋毛虫实验感染昆明小鼠动物模型,拟通过病理学和分子生物学实验手段检测旋毛虫感染小鼠模型不同时间小肠组织和肌肉组织的细胞凋亡情况,探讨旋毛虫感染状态下宿主被寄生部位组织细胞凋亡的发生机理,以选择性的促进或抑制细胞凋亡的发生,为预防、治疗旋毛虫病、杀灭旋毛虫提供实验基础。方法：将80只雄性健康小鼠随机分为A组（成虫期）和B组（幼虫期）,每组40只。A组随机分为感染旋毛虫3、5、7d组及正常对照组,每组10只；B组随机分为感染旋毛虫3、4、5w组及正常对照组,每组10只。每组小鼠各感染旋毛虫幼虫200条,对照组正常饲养。A组小鼠分别于感染后3、5、7d取其小肠组织,B组小鼠分别于感染后3、4、5w取其肌肉组织。常规病理切片,苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠小肠和肌肉组织的病理学变化,Western-blot法检测不同感染时期小肠和肌肉组织中Caspase-3蛋白表达水平的变化,原位末端标记法（TUNEL法）检测小鼠小肠和肌肉组织的细胞凋亡指数。运用病理学和分子生物学方法对旋毛虫成虫引起小肠组织,幼虫引起肌肉组织的细胞凋亡情况进行综合评价。结果：1成虫期：1.1 HE染色结果：正常对照组小鼠小肠组织未见任何病理变化,小肠绒毛结构正常,黏膜层无改变,黏膜上皮无变化,固有膜正常；感染3d组小肠黏膜层上皮细胞水肿不明显,黏膜层稍见出血,固有膜空泡状改变不明显；感染5d组小肠黏膜层上皮细胞可见轻微水肿,黏膜层肠腺可见明显出血,炎细胞较少,固有膜明显空泡状改变；感染7d组小肠黏膜层大量炎性细胞浸润并伴有大量出血,局部黏膜上皮细胞水肿,固有膜空泡状改变更加显著,肠绒毛缺损明显。1.2 Western-blot结果：正常对照组小鼠Caspase-3蛋白平均灰度值为（0.79+0.03）,旋毛虫成虫发育过程中,Caspase-3蛋白平均灰度比值随着旋毛虫感染时间的延长明显增加（P<0.05）。感染3、5、7d组的各个灰度值分别为（0.86+0.03）、（1.04+0.02）、（1.34+0.02）。与正常对照组相比,感染旋毛虫3、5、7d组Caspase-3蛋白平均灰度比值明显增加（P<0.05）,3、5、7d组组间两两比较亦具有差异性（P<0.05）。1.3 TUNEL法结果：正常对照组小肠黏膜层可见零星散在的,细胞核呈深棕色或棕黄色的凋亡细胞,细胞凋亡指数为（0.08+0.02）%,随着感染时间的增长,细胞凋亡指数明显增加,旋毛虫感染3、5、7d组细胞凋亡指数分别为（0.26+0.03）%、（0.38±±0.03）%和（0.73+0.09）%。与正常对照组相比（P<0.05）,3、5、7d组组间两两比较均具有显著性差异（P<0.05）。2幼虫期：2.1 HE染色结果：正常对照组小鼠肌肉组织未见任何病理学变化,肌纤维粗细均匀,排列规律整齐,随着感染时间延长至第3w、4w,HE染色结果表现为肌纤维变性肿胀、粗细不均匀、排列紊乱、横纹消失,呈网状结构,虫体所在部位肌浆溶解,虫体附近的肌细胞坏死、崩解,肌间质水肿及炎性细胞浸润,炎性细胞主要以淋巴细胞、大单核细胞和嗜酸性粒细胞为主。感染第5w,幼虫周围形成囊包,随着幼虫长大、卷曲,寄生部位肌组织逐渐增大呈纺锤状,形成梭形肌腔包绕虫体,急性炎症逐渐消退。2.2 Western-blot结果：正常对照组小鼠Caspase-3蛋白平均灰度值为（0.23±0.02）,旋毛虫幼虫发育过程中,感染第3、4w,Caspase-3蛋白平均灰度比值随着旋毛虫感染时间的延长明显增加,分别为（0.31+0.02）和（0.54+0.02）。感染第5w,幼虫周围囊包形成,急性严重消退,Caspase-3蛋白平均灰度值明显下降为（0.36+0.03）。与正常对照组相比,感染旋毛虫3、4、5w组Caspase-3蛋白平均灰度比值明显增加（P<0.05）,3、4、5w组组间两两比较亦具有显著性（P<0.05）。2.3 TUNEL法结果：正常对照组小鼠肌肉组织中可见零星散落的,细胞核呈深棕色或棕黄色的凋亡细胞,即基本无表达,其细胞凋亡指数为（0.12±±0.03）%,随着感染时间增长,细胞凋亡指数明显增加,旋毛虫感染3、4、5w组细胞凋亡指数分别为（0.32+0.05）%、（0.68+0.03）%和（0.47+0.05）%。与正常对照组相比（P<0.05）,3、4、5w组组间两两比较均具有显著性差异（P<0.05）。结论：1旋毛虫与宿主在相互作用过程中存在细胞凋现象,旋毛虫感染所致宿主寄生部位组织细胞凋亡与病理损伤存在一定的关系。2旋毛虫成虫侵袭小鼠肠道可诱导宿主小肠组织发生细胞凋亡,在一定时间内,随着感染时间延长,组织凋亡水平亦增加,感染第7d达到凋亡的高峰。3旋毛虫幼虫寄生于小鼠肌肉组织可诱导宿主肌肉组织发生细胞凋亡,且组织凋亡水平与感染时间存在密切的相关性,感染3、4w细胞凋亡水平明显上升,到达第5w,此时囊包形成,细胞凋亡水平下降。