论文摘要
本文以斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）及其肠道原籍有益菌——革兰氏阳性芽孢杆菌DE5、SE5和革兰氏阴性嗜冷杆菌SE6为对象,研究了活性和热灭活益生菌对斜带石斑鱼生长性能、血清免疫指标、肠道和头肾的免疫相关基因表达以及肠道菌群结构的影响。选取525尾大小一致的斜带石斑鱼幼鱼（14.6±0.2g）,随机分成7个组,对照组T0不添加益生菌,6个试验组（T1、T2、T3、T4、T5和T6）分别在基础饲料中添加含活性芽孢杆菌DE5（T1组）、热灭活芽孢杆菌DE5（T2组）、活性芽孢杆菌SE5（T3组）、热灭活芽孢杆菌SE5（T4组）、活性嗜冷杆菌SE6（T5组）和热灭活嗜冷杆菌SE6（T6组）,添加量均为1.0×108 cfu/g,饲喂期为60 d。试验共四个部分,结果表明:（1）饲养前期（0-30d）,活性嗜冷杆菌SE6（T5组）末均重（FBW）和特定生长率（SGR）显著高于对照组（P<0.05）;T3、T4、T5和T6的增重率显著高于对照组（P<0.05）;饵料系数方面,各试验组与对照组相比均有所降低,其中T4和T5组显著下降（P<0.05）;饲养后期（31-60d）,T4、T5和T6组的末均重显著高于对照组（P<0.05）;T4组的SGR显著高于T0组（P<0.05）,其余各试验组略有增加,但没有显著差异（P>0.05）;饵料系数方面,T2和T4组均显著低于对照组（P<0.05）,其他各组无显著差异（P>0.05）;饲养全期（0-60d）,试验组T4、T5和T6显著提高石斑鱼生长性能,表现在其平均增重、SGR和增重率均分别显著高于对照组（P<0.05）,其余试验组和对照组没有显著差异（P>0.05）;与对照组相比,试验组的饵料系数均有所下降,其中试验组T1、T2、T3、T4和T5显著降低（P<0.05）。（2）各试验组在30d时对石斑鱼血清的溶菌酶活力、T-SOD活力、补体C3以及Ig M含量均没有显著影响（P>0.05）。饲养30d时,和对照组相比,试验组T1、T3、T4和T6的血清溶菌酶均有所增加,且T3、T4和T6组血清T-SOD也高于对照组,同时各试验组的补体C3含量和Ig M含量均高于对照组;试验60d时,T1、T2、T5和T6组的血清溶菌酶活性均高于对照组（P>0.05）;各试验组的T-SOD活性也高于对照组,但差异不显著（P>0.05）;同对照组相比,各试验组的血清Ig M水平均有提高,其中T4、T5和T6组显著提高（P<0.05）;除T1组以外,其他试验组的补体C3水平均高于对照组,T4和T5组显著高于对照组（P<0.05）。综合结果分析,活性和热灭活的3株益生菌对石斑鱼血清免疫功能有不同程度的促进作用。（3）本研究运用Real-time PCR技术研究发现添加活性和热灭活3种不同的益生菌在60d时对石斑鱼的免疫相关基因表达有一定的影响。与对照组相比,添加活性芽孢杆菌DE5（T1组）没有显著诱导石斑鱼头肾和肠道免疫相关基因表达（P>0.05）,仅肠道TLR2、IL-8和Ig M基因略有上升;而添加热灭活的DE5（T2组）显著上调石斑鱼肠道TLR5、My D88、IL-8、IL-1β、TGF-β1的表达量和头肾的TLR5、IL-8和IL-1β的相对表达（P<0.05）;添加活性的芽孢杆菌SE5（T3组）能显著上调肠道TLR1和头肾My D88的表达量（P<0.05）,另外肠道TLR2、My D88、IL-8、IL-1β、Epinecidin-1和Ig M基因和头肾的TLR2、IL-1β、TGF-β1和Ig M均有上升,但无显著差异（P>0.05）;添加灭活芽孢杆菌SE5（T4组）显著上调石斑鱼肠道的TGF-β1的表达（P<0.05）;添加活性嗜冷杆菌SE6（T5组）显著上调石斑鱼肠道的TLR2、TLR5、TGF-β1、Epinecidin-1和头肾的TLR1、TLR5、IL-8等基因（P<0.05）;添加热灭活嗜冷杆菌SE6（T6组）显著上调了石斑鱼肠道Epinecidin-1和头肾的TLR1和TGF-β1的表达（P<0.05）。（4）本试验运用PCR-DGGE技术,研究了饲喂活性和热灭活芽孢杆菌DE5和嗜冷杆菌SE6 30d和60d时对斜带石斑鱼肠道菌群的组成的影响。结果显示与对照组相比,活性的芽孢杆菌DE5（T1组）在30d时出现未可培养的大肠杆菌（Uncultured Escherichia sp.）和痢疾杆菌（Shigella dysenteriae strain）;T1和T2组在30d时出现未可培养的大肠杆菌（Uncultured Escherichia sp.）,但T2组在60d时该条带消失。热灭活芽孢杆菌DE5（T2组）在30d时出现未可培养变性杆菌;T1组在60d时出现未可培养细菌和和弧菌的定植;与对照组相比,T3组在30d时出现特异细菌（发光杆菌、未可培养细菌和未可培养海洋浮游细菌）的定植,T4组在30d时增加了三种未可培养细菌,但减少了未可培养变形杆菌的定植。T4组在60d时增加了未可培养大肠杆菌,但减少了Psychroserpens burtonensis subsp.damselae strain,未可培养细菌和未可培养埃希氏菌的定植;与对照组相比,T5组在30d出现未可培养γ变形杆菌,T6组在30d时出现了两种未可培养细菌;在60d时实验组T5和T6有3条未可培养细菌的条带消失。