福建香蕉种质资源遗传多样性的RAPD分析

福建香蕉种质资源遗传多样性的RAPD分析

论文摘要

香蕉是福建重要的亚热带特色水果,栽培历史悠久,有着很高的经济价值。但由于香蕉为无性繁殖,而且又是多倍体,其遗传背景复杂,生产上常出现同物异名和同名异物现象,品种类型分类混乱,这些都造成了其种质资源保存利利州的困难。本研究利用RAPD分子标记技术对以福建香蕉遗传资源为主的54份材料进行遗传多样性分析。主要研究结果如下:1.利用改良的CTAB方法从香蕉叶片中提取高质量的DNA。2.香蕉RAPD-PCR反应体系的优化。在参考一般RAPD分析反应程序的基础上,经过反复试验,确定适合香蕉PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min;38℃退火1min;72℃延伸2min;变性(?)延伸,循环45次;最后72℃延伸2min。PCR扩增的体系(总体积25μL)为:模板DNA 20ng,dNTP 200μmol/L,10×PCR Buffer2.5μL,引物0.20μmol/L,Taq酶0.75U,ddH2O17.85μL。3.香蕉种质资源的RAPD分析。利用16条随机引物,对香蕉54份遗传资源进行PCR扩增,每条引物均能够产生清晰的条带,共扩增出194条DNA带,其中191条皆为多态性条带,多态性比例为98.45%,如此高的多态性表明香蕉品种间具有丰富的遗传多样性。借助SPSS13.0软件分析RAPD表型数据矩阵,计算各样品间的相似系数,建立亲缘关系聚类树状图。依据此图,以遗传距离GD=0.70为界,将供试香蕉品种分成三大类群:第一类群包括了36份材料,主要为香牙蕉类:第二类群包括了11份材料,以粉蕉和龙牙蕉为主;第三类群包括了7份材料,以大蕉为主。4.利用16条RAPD引物扩增产生的4个特殊标记的存在或缺失,可以鉴定广东湛江巨龙蕉、南丰芭蕉和野生角蕉3份资源。5.筛选出21个香蕉材料可作为核心种质保存,这些材料扩增出来的条带可以代表香蕉种质资源的遗传多样性水平,涵盖了香牙蕉、粉蕉和大蕉这三大类型;除了常见的AAA、AAB和ABB三种基因型外,也包含了AA基因型(海南西贡蕉);在包含常见栽培种的同时,也包含了漳蕉8号、汕头红蕉和海南巴西蕉等新品种和珍贵品种。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 缩写词及英汉对照
  • 1 引言
  • 1.1 香蕉概况
  • 1.2 香蕉的起源与分类
  • 1.2.1 香蕉的起源
  • 1.2.2 香蕉的品种和分类
  • 1.2.3 福建省香蕉主要栽培品种
  • 1.3 香蕉种质资源遗传多样性的研究现状
  • 1.3.1 形态学标记
  • 1.3.2 细胞学标记
  • 1.3.3 生化标记
  • 1.3.4 分子标记
  • 1.4 RAPD分子标记技术原理及其应用
  • 1.4.1 RAPD技术的基本原理
  • 1.4.2 RAPD技术的特点
  • 1.4.3 RAPD技术在植物种质资源遗传多样性研究中的应用
  • 1.5 福建香蕉种质资源研究现状
  • 1.6 本研究的目的及内容
  • 2 材料与方法
  • 2.1 试验植物材料
  • 2.2 试验仪器设备
  • 2.3 试验试剂
  • 2.4 RAPD分析方法
  • 2.4.1 香蕉DNA的提取
  • 2.4.2 香蕉DNA浓度及纯度测定
  • 2.4.3 RAPD-PCR反应体系的建立
  • 2.4.4 引物的筛选
  • 2.4.5 RAPD-PCR数据分析
  • 3 结果与分析
  • 3.1 模板DNA的提取
  • 3.2 香蕉RAPD反应体系与反应程序的确立
  • 3.2.1 RAPD反应体系的优化
  • 3.2.2 PCR最佳反应体系和反应程序的确立
  • 3.3 引物筛选
  • 3.4 聚类分析
  • 3.5 分子鉴别
  • 3.6 核心种质的选择
  • 4 讨论
  • 4.1 香蕉基因组DNA的提取与纯化
  • 4.2 香蕉RAPD反应的稳定性和重复性
  • 4.3 福建香蕉种质资源的遗传多样性分析
  • 4.3.1 聚类分析
  • 4.3.2 分子鉴别
  • 4.3.3 核心种质的选择
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 相关论文文献

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