论文摘要
第一部分Bin1-b蛋白及mRNA在少弱精子症模型大鼠附睾中的表达目的验证Bin1-b蛋白及其mRNA在少弱精子症模型大鼠附睾中的表达,探讨Bin1-b在病理状态下的附睾中表达的改变。方法取雄性大鼠30只,随机分为两组,实验组给予雷公藤（10mg/kg/d）灌胃,连用8周造成少弱精子症模型;对照组给予1%羧甲基纤维钠混悬液灌胃。采用免疫组化S-P法和原位杂交方法检测Bin1-b蛋白和Bin1-b mRNA在两组大鼠附睾组织中的表达情况。结果Bin1-b蛋白和mRNA表达于对照组、模型组大鼠的附睾管腔上皮、主细胞、基细胞,但模型组中的表达明显增强（P<0.05）。结论Bin1-b蛋白及其mRNA在少弱精子症大鼠附睾内表达较正常大鼠明显增强,该结果提示Bin1-b可能是病理状态下雄性大鼠生殖系统的内源性防御分子之一。第二部分Bin1-b多克隆抗体对人类精子功能的影响目的观察Bin1-b抗体与精子结合情况和抗体对精子线粒体、运动能力、体外获能、顶体反应等功能的影响,探讨Bin1-b对精子在附睾中发育、成熟、获能和受精能力所起的作用。方法按世界卫生组织标准选取正常精液标本,经上游优化,与抗Bin1-b多克隆抗体（终浓度为1:200）孵育,荧光显微镜观察抗Bin1-b多克隆抗体与人精子结合情况,用CASA系统检测抗体对精子活力的影响,金霉素染色观察抗体对体外获能的影响,考马斯亮兰R250染色观察抗体对顶体反应的影响,JC-1荧光染色流式细胞检测仪观察抗体对精子线粒体功能的影响。结果1、实验所用的抗Bin1-b多克隆抗体与人精子结合于精子头部,未发现非特异性结合。2、精子和终浓度为1:200的Bin1-b抗体体外培养1 h、2 h、4 h后,活力下降,与对照组相比,各时间点的差异均有显著性意义（P <0.05或P <0.001）。3、抗体处理组线粒体高膜电位精子数减少,与对照组相比,差异有显著性意义（P <0.01）。4、与对照组相比,1 h后抗体处理组精子获能率降低,差异有显著性意义（P <0.001）5、与对照组相比,5 h后抗体处理组精子顶体反应发生率下降,差异有显著性意义（P <0.01）。结论抗Bin1-b多克隆抗体特异地结合与人精子头部,显著降低了精子线粒体膜电位和精子的运动能力,也抑制了精子获能和顶体反应等与生殖密切相关的生理功能。